TA的每日心情 | 怒 3 天前 |
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原理:采用沉降法,即通过于培养皿中利用自然沉降原理收集在空气中的生物粒子,经不少于48小时的培养,在30—35℃下让其繁殖到可见的菌落进行计数,以菌落数来判定洁净环境内的活微生物数,并以此来评定洁净室(区)的洁净度。
4 U& z$ X" v' H. G+ |+ K
. |, D: u+ ? M2 v- B, B0 u! f8 p主体内容:
9 J- i A& `% `1. 器材:
4 n4 @5 t! U- @3 Y( g' p: R高压消毒锅:使用时严格按照说明书操作。& S- g' l$ y3 a2 b; [
恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。2 d, J8 v. E* }" b
培养皿:Φ90mm玻璃培养皿$ R2 D' t5 W& v) [
培养基:营养琼脂4 {, d# U, E4 U5 V
2. 操作程序
; l* V, K" t/ K' n, C2.1 采样( k* L7 _ u( g/ F7 A" a
将已制备好的培养平皿按要求放置,打开培养皿盖,使培养基表面暴露0.5小时,再将培养皿盖盖上后倒置。5 k- n5 c C, [4 Y1 X
2.2 培养:6 ]7 b) U) r2 x/ k( a# z& b
2.2.1 全部采样结束后,将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
) d% G6 J7 K1 H; l- b2 z7 E2.2.2 在30~35℃培养箱中培养,时间不少于48小时。
3 j' @( B$ D+ ^8 S) @2.2.3 每批培养基应有对照实验,检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿做对照实验。
6 t# L9 V4 i; r; q% B$ N2.3 菌落记数- R+ Q- S8 m0 q1 c; Y
2.3.1用肉眼直接计数,标记或在菌落计数器上点计,然后用5~10倍放大镜检查,是否有遗漏。
" T6 B3 i& T% ^; i7 j/ i2.3.2 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠,可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。* T' P+ n4 Y! R$ C+ t' E
2.4 注意事项
! U& K7 b& `5 i9 A2.4.1 测试用具要做灭菌处理,以确保测试的可靠性、正确性。
: E4 X1 ?% I* N; \) m2.4.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。
q I/ v7 Y! G6 n' I3 u2.4.3 对培养基、培养条件及其他参数做详细的记录。& S+ c& L9 }5 j. w: c- m$ k- T( m
2.4.4 由于细菌种类繁多,差别甚大,计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察,不要漏计培养皿边缘生长的菌落,须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别,必要时用显微镜鉴别。
: h7 h k/ U" B4 r2.4.5 采样前应仔细检查每个培养皿的质量,如发现变质、破损或污染的应剔除。
4 J: s( S. y& L R$ }3. 测试规则" E) X. g( j" J; m- N
3.1 测试状态
: i$ O- x5 `- N& x y" v1 g/ E3.1.1 沉降菌测试前,被测试洁净室(区)的温湿度须达到规定的要求,静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。; f4 _8 @- @$ a4 `* X2 m; Y
3.1.2 沉降菌测试前,被测试洁净室(区)已经过消毒。 ?# r1 [/ R5 ~9 k
4.1.3 测试状态有静态和动态两种,测试状态的选择必须符合生产要求,并在报告中注明测试状态。
6 A2 D# f1 V; }2 [3 R3.2 测试人员. a+ B; O3 N8 k: ~0 L9 s* L4 H
3.2.1 测试人员必须穿戴符合环境洁净级别的工作服。3 o% a6 K. l) J# ?
3.2.2 静态测试时,室内测试人员不得多于二人。
; n! V \6 `! ~6 t, w/ o2 g0 o3.3 测试时间
* \) y _8 _9 t! F9 S8 d2 j3.3.1 对单向流,如100级净化房间及层流工作台,测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
$ |5 d ] D) I. m" g3.3.2 对非单向流,如10,000级,100,000级以上的净化房间,测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。 I. [$ V( ]' r( O, g
3.4 沉降菌计数
* j3 R' Z+ d& ~3.4.1 采样点数目及其布置' n$ e' h* x: E7 b8 G
沉降菌测试的最少采样点数目可查表1确定。在满足最少测点数的同时,还宜满足最少培养皿数,见表2。) q* y; O# A+ `: W0 {: F
: O1 g$ I: ~8 k- Z- W* c1 f
表1 最小采样点数目! c" Q+ _* R! s, Q; g. E$ j
. n; Q- G& q+ H3 e
面积1 Y' ]! W! f! x1 t
m2 洁净度级别
/ }" b- B9 d5 d9 Q9 I/ [: s! t 100 10,000 100,000 300,000
$ _) p1 v/ q5 i7 X5 ~( r+ s& }, U<10 2~3 2 2 2' g* l; C+ ~" w: Q
≥10~<20 4 2 2 2
: W! E- P$ ~2 q$ s6 s≥20~<40 8 2 2 2' P" N# p4 d. A$ ~
≥40~<100 16 4 2 2# M0 m4 X' O, S: R4 {
≥100~<200 40 10 3 2) _: B( T. X y& f
注:表中的面积,对于单向流洁净室,指的是送风面积;对非单向流洁净室,指的是房间面积。. d( C: x' o5 r5 r. A
表2 最少培养皿数1 _ T% v+ U4 t ]8 i5 Q& G; H1 H# x7 L
洁净度级别 所需Φ90mm培养皿数
/ } ~3 F, f# ^+ j100 14
9 w$ l; s: P2 @& F* u10,000 2+ D! Q4 Y' n% C9 z/ x9 }- V
100,000 2
: @% \# j6 {( Z- B) C9 Z1 ^+ m9 g7 F300,000 2
8 D( D3 ?) w2 W1 o0 T5 [% ~! O) `3.5.2 采样点的位置# P* M" h/ D w! V* o6 }
3.5.2.1工作区采样点的位置离地0.8~1.5m左右(略高于工作面)。0 n0 w) C8 x+ F' `
3.5.2.2 可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。) C# `' W8 a4 d$ t1 Q1 \; e
3.6 记录:测试报告中应记录房间温度、相对湿度及测试状态。
9 ^8 q9 V* Z7 h9 n! o$ F9 G" b7 u3.7 结果计算. n9 V/ \: l6 i& s+ a
3.7.1 用计数方法得出各个培养皿的菌落数.$ S/ o1 j3 C2 G7 }
3.7.2平均菌落数的计算:! N, D$ B7 p" r2 }! F/ B6 h( D ?
平均菌落数=(M1+M2+…Mn)/n 7 k" A4 g0 d, n1 J7 s* G
式中: M1 — 1号培养皿菌落数
% B2 u. P' r, c: @2 h' [; Z M2 — 2号培养皿菌落数
8 v- V& Z2 F J g Mn — n号培养皿菌落数6 Q8 q% b1 x- k
n — 培养皿总数。* S, Y" m, o2 d1 Q z% z, o
3.8 结果判定
1 T) N |2 I$ `4 P! @" D" _用平均菌落数判断洁净室(区)空气中的微生物数。& H. S. G9 n; \7 u3 F" y M
3.8.1洁净室(区)内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。
) j& s4 f2 F/ v& g7 Z! @- H3.8.2若某洁净室(区)内的平均菌落数超过评定标准,则必须对此区域先进行消毒,然后重新采样两次,测试结果均需合格。
" F. x' \4 ^, y2 I3 W/ G6 y- q: B4 @+ ^# n) I$ |
附录
! ]! F3 \8 C) b; x培养基的准备及灭菌, _; u( n! S: |5 c
1. 培养基的准备! ?3 ~4 j+ `: f- |# U
营养琼脂培养基可以外购或自行配制。自行配制方法见YY/T018 6-1995第6章无菌检查部分中关于此类培养基的配制和操作步骤。其他符合药典灵敏度要求的培养基亦可自行配制。% m( M+ A* Z6 s0 u. o( }# g
2. 营养琼脂培养基平皿的准备
# M: S. x& [8 R/ r& P4 X% }0 ~2.1 将培养皿置于121℃湿热灭菌20min或180℃干热灭菌2h。
9 t( g% G6 n% J o3 A0 ], f2.2 称取适量培养基于三角瓶中,加相应数量水加热使营养琼脂培养基溶解,用牛皮纸包扎,置于121℃湿热灭菌20min,冷却至45℃,在无菌操作要求下将培养基注入培养皿。每皿约15ml。
; [: E* Q7 c. @! B$ ^* l2.3 待琼脂凝固后,将培养基平皿倒置于30℃~35℃的恒温培养箱中培养48h,若培养皿基平皿上确无菌落生长,即可供采样用。
2 _% n7 M# c7 t# C5 L3 ~/ t& W注:培养基平皿宜在2℃~8℃的环境中存放。 |
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