TA的每日心情 | 慵懒 3 天前 |
|---|
签到天数: 2133 天 连续签到: 3 天 [LV.Master]伴坛终老
|

|
原理:采用沉降法,即通过于培养皿中利用自然沉降原理收集在空气中的生物粒子,经不少于48小时的培养,在30—35℃下让其繁殖到可见的菌落进行计数,以菌落数来判定洁净环境内的活微生物数,并以此来评定洁净室(区)的洁净度。6 i A4 o' [' Z0 N# E# o
. Q$ h3 b0 `+ Z主体内容: ( R9 e. b; Q4 y
1. 器材:/ X+ S% N7 n' W4 _ v0 @. J p
高压消毒锅:使用时严格按照说明书操作。
1 l0 e: m3 n) l& ~4 S恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。" ^# t/ r! T2 ?2 L) v
培养皿:Φ90mm玻璃培养皿) p# V( [# r7 I: f }# ]- k
培养基:营养琼脂
3 G3 I! s% F; ^7 T" y# H! \2. 操作程序% k/ b; h6 Z( O8 M% M
2.1 采样1 |' y! G# p2 R8 E
将已制备好的培养平皿按要求放置,打开培养皿盖,使培养基表面暴露0.5小时,再将培养皿盖盖上后倒置。" w: `) C" n: H' q
2.2 培养:* l. c& @2 c; y2 o" e2 B" {
2.2.1 全部采样结束后,将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
. b$ M8 N1 ~) \, ?2.2.2 在30~35℃培养箱中培养,时间不少于48小时。
) n, j: ^" G4 s" ~' J2.2.3 每批培养基应有对照实验,检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿做对照实验。
% k1 l# q [# l/ z$ e2 @2.3 菌落记数
% Y U0 N, ~2 j2.3.1用肉眼直接计数,标记或在菌落计数器上点计,然后用5~10倍放大镜检查,是否有遗漏。
7 T! s" o6 t3 N4 a2.3.2 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠,可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。! X+ Y: g4 d. G( Q; s+ R w' b
2.4 注意事项9 d% Q( ?. _- y& k; c+ U
2.4.1 测试用具要做灭菌处理,以确保测试的可靠性、正确性。
, y8 e/ [- J/ v7 T2.4.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。
" B# B( L; n1 Y/ G: t2 h2.4.3 对培养基、培养条件及其他参数做详细的记录。
3 K% ~0 b a2 j& e1 V2.4.4 由于细菌种类繁多,差别甚大,计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察,不要漏计培养皿边缘生长的菌落,须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别,必要时用显微镜鉴别。
2 y" b, z# q, [/ E+ x$ P% O2.4.5 采样前应仔细检查每个培养皿的质量,如发现变质、破损或污染的应剔除。9 |8 q# ]: Y0 Q/ f/ J l( C
3. 测试规则
, p7 t7 T# |( E# v' {3 x W3.1 测试状态! E+ c5 r# q1 j- Y8 L
3.1.1 沉降菌测试前,被测试洁净室(区)的温湿度须达到规定的要求,静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
/ t/ A8 z3 c, K0 D: S, l3.1.2 沉降菌测试前,被测试洁净室(区)已经过消毒。
' v6 f# j$ h- ?. o3 Q$ p& d4.1.3 测试状态有静态和动态两种,测试状态的选择必须符合生产要求,并在报告中注明测试状态。+ }% `5 R( t$ i5 W' ~3 y0 X9 j
3.2 测试人员6 u& g: M7 y/ _3 G
3.2.1 测试人员必须穿戴符合环境洁净级别的工作服。
8 ^2 w% P5 g( N3.2.2 静态测试时,室内测试人员不得多于二人。
# t3 M0 Y3 b: l+ [3.3 测试时间
7 @ z6 K# E4 Q# \0 _' C e3.3.1 对单向流,如100级净化房间及层流工作台,测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。2 t6 |2 L: j+ F
3.3.2 对非单向流,如10,000级,100,000级以上的净化房间,测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。9 A2 N( O5 x' V. i5 v3 g8 Y4 N. n! W
3.4 沉降菌计数+ A% i) @6 s, q5 ?+ ~
3.4.1 采样点数目及其布置
/ ^- k9 i( R- ]) m* x+ y( r* {沉降菌测试的最少采样点数目可查表1确定。在满足最少测点数的同时,还宜满足最少培养皿数,见表2。
+ \1 c& b, r( q& ~# j! [; \( r# f! x
表1 最小采样点数目. e0 }4 B! n0 T D/ H W
3 c0 B- R$ b6 k& m
面积
* Y8 q5 K6 p5 i. |( t9 K# G s5 Lm2 洁净度级别
4 R: i) ] z) h# U' d 100 10,000 100,000 300,000! p- X! ?+ V g9 F: X4 e* j
<10 2~3 2 2 2
/ a% d$ [) ]5 G% Z1 n) |7 T C≥10~<20 4 2 2 2
6 J; H6 n- U2 W7 P≥20~<40 8 2 2 2
3 Y+ A, l! N! l* d≥40~<100 16 4 2 2
- D! p, u( K. Q2 A≥100~<200 40 10 3 2
& p. l' g. w' z: u/ h' \注:表中的面积,对于单向流洁净室,指的是送风面积;对非单向流洁净室,指的是房间面积。
& R# x0 A" b/ z, @, C# r Y表2 最少培养皿数& w1 [% \/ t# L& _' d% A! n( A
洁净度级别 所需Φ90mm培养皿数# X* N. R1 u0 B- G
100 14
. \2 E4 F9 I1 T: }10,000 2
2 m7 i# }/ K7 r- z100,000 2
9 } p: [3 V* H$ T+ c300,000 24 P, d, Z6 t0 H* f/ Y
3.5.2 采样点的位置1 e1 T- `" S! P9 d- e' {/ F9 S1 g4 l
3.5.2.1工作区采样点的位置离地0.8~1.5m左右(略高于工作面)。3 e( h& V7 ~0 \& f8 N$ R* h( n
3.5.2.2 可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
: J% N0 R' ?& V9 n& t9 m" Q, x ^3.6 记录:测试报告中应记录房间温度、相对湿度及测试状态。
( I8 K2 U, P; R: ]3.7 结果计算
( i" L; z/ \: s, L" X: \ G2 t' D, y0 |3.7.1 用计数方法得出各个培养皿的菌落数.
( V; a' S5 n r0 m3.7.2平均菌落数的计算:2 H5 ~$ v7 s; n8 F# G
平均菌落数=(M1+M2+…Mn)/n 5 r( `) H& q3 o# g* q3 O e# u& x
式中: M1 — 1号培养皿菌落数' k% I! Q, a4 o- ~6 b- _
M2 — 2号培养皿菌落数
, T3 q' F, i; E5 } Mn — n号培养皿菌落数: M, q- e' s1 r \% j9 D7 I8 n
n — 培养皿总数。. e# X" F, Z+ N' G8 f: s
3.8 结果判定
. I+ g0 k) B9 Y) D: {; ?用平均菌落数判断洁净室(区)空气中的微生物数。9 k& I: ^. I; Q, h6 m$ N/ k
3.8.1洁净室(区)内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。
# C9 R' J# |8 _& u% j1 q1 `, `3.8.2若某洁净室(区)内的平均菌落数超过评定标准,则必须对此区域先进行消毒,然后重新采样两次,测试结果均需合格。0 r( M. W: Q) Z1 q, O7 Q
( k: [, U2 f6 W) E/ d附录
' j$ b9 i/ S& N/ a! W0 `2 A培养基的准备及灭菌) W6 F' X- ~, h' }8 F e2 `* T- n
1. 培养基的准备
2 ?$ y# ~) m8 S1 E7 w营养琼脂培养基可以外购或自行配制。自行配制方法见YY/T018 6-1995第6章无菌检查部分中关于此类培养基的配制和操作步骤。其他符合药典灵敏度要求的培养基亦可自行配制。
6 F7 I$ u2 K2 `1 F5 `' O8 u5 p2. 营养琼脂培养基平皿的准备( e! b; Y" S( n- _$ n
2.1 将培养皿置于121℃湿热灭菌20min或180℃干热灭菌2h。
7 `. y( X! ]4 x/ G, g# g, E1 G" |2.2 称取适量培养基于三角瓶中,加相应数量水加热使营养琼脂培养基溶解,用牛皮纸包扎,置于121℃湿热灭菌20min,冷却至45℃,在无菌操作要求下将培养基注入培养皿。每皿约15ml。0 h, n: _% S: E0 H$ Z+ e9 ^4 d
2.3 待琼脂凝固后,将培养基平皿倒置于30℃~35℃的恒温培养箱中培养48h,若培养皿基平皿上确无菌落生长,即可供采样用。) j# K+ Y1 M: I; s
注:培养基平皿宜在2℃~8℃的环境中存放。 |
|