TA的每日心情 | 慵懒 3 天前 |
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签到天数: 2133 天 连续签到: 3 天 [LV.Master]伴坛终老
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原理:采用沉降法,即通过于培养皿中利用自然沉降原理收集在空气中的生物粒子,经不少于48小时的培养,在30—35℃下让其繁殖到可见的菌落进行计数,以菌落数来判定洁净环境内的活微生物数,并以此来评定洁净室(区)的洁净度。
2 [9 F9 F/ x7 S; ^- d" p
$ y& S+ m- [$ y0 E; @4 }6 i, ]主体内容:
. G- j: G* e9 @" P* n1. 器材:
: E+ I& E9 j% q+ \: U( h# _高压消毒锅:使用时严格按照说明书操作。
3 f3 l* \5 c6 d* c3 a1 N$ J# ~恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。
" O z% e! r; j7 G( e2 P; H H- B培养皿:Φ90mm玻璃培养皿$ J5 L7 K2 B( d( ]: g
培养基:营养琼脂
# z1 A$ X# t2 K$ c, r; j4 i4 D2. 操作程序* m) T n, z' v8 {& f
2.1 采样
. Q, U0 r& R, c+ z6 C将已制备好的培养平皿按要求放置,打开培养皿盖,使培养基表面暴露0.5小时,再将培养皿盖盖上后倒置。
1 u- ~4 w) Q4 ^% _+ \. [( t6 s2.2 培养:
+ H2 ~6 u. m. l3 G8 O7 v* c$ b2.2.1 全部采样结束后,将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。8 D+ u: S+ J+ @7 N) z) G! g
2.2.2 在30~35℃培养箱中培养,时间不少于48小时。
% i s1 N3 e1 |8 a5 u' m, Q; c2.2.3 每批培养基应有对照实验,检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿做对照实验。* H: b3 v2 K) [( \/ v
2.3 菌落记数5 [1 X4 R: w4 \
2.3.1用肉眼直接计数,标记或在菌落计数器上点计,然后用5~10倍放大镜检查,是否有遗漏。! i& V. ~4 Y" b
2.3.2 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠,可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。: P- O% M9 n, b& N, b
2.4 注意事项
: Q; M+ X" ?2 d. F- g* r6 M, C) M- `) y2.4.1 测试用具要做灭菌处理,以确保测试的可靠性、正确性。
# h- r6 t3 ^' x q2.4.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。
' A& E$ M3 j! `" q- l! f& c, y3 v3 W2.4.3 对培养基、培养条件及其他参数做详细的记录。
# `' ?1 M, v8 ]2.4.4 由于细菌种类繁多,差别甚大,计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察,不要漏计培养皿边缘生长的菌落,须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别,必要时用显微镜鉴别。
/ I3 z' A* R0 b/ U# r2.4.5 采样前应仔细检查每个培养皿的质量,如发现变质、破损或污染的应剔除。
R4 ]9 f7 L) c2 ^! s! H3. 测试规则) W: X; A# L; D5 D2 [ @
3.1 测试状态
. q/ h: P/ }! b3.1.1 沉降菌测试前,被测试洁净室(区)的温湿度须达到规定的要求,静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
- Y7 m/ K2 N! t+ z3.1.2 沉降菌测试前,被测试洁净室(区)已经过消毒。
: C, C* u; _; Q( u0 P; j4.1.3 测试状态有静态和动态两种,测试状态的选择必须符合生产要求,并在报告中注明测试状态。
& x4 |) w& J7 d& y6 x- `3.2 测试人员8 u% T; R9 r' |8 q
3.2.1 测试人员必须穿戴符合环境洁净级别的工作服。- c) i, r9 y5 y0 G0 \
3.2.2 静态测试时,室内测试人员不得多于二人。
" a9 Y3 S9 [- @0 i* ~0 H, L3.3 测试时间
7 X0 f o( n1 M( ~3.3.1 对单向流,如100级净化房间及层流工作台,测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。( U* o5 u$ Y- ?
3.3.2 对非单向流,如10,000级,100,000级以上的净化房间,测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。; R' M1 W* ?: i- s) J9 p
3.4 沉降菌计数
4 z" v! [/ c. Y. K# M3.4.1 采样点数目及其布置
* l/ R: g) T6 w沉降菌测试的最少采样点数目可查表1确定。在满足最少测点数的同时,还宜满足最少培养皿数,见表2。; ?7 x( Y5 J% ]. n) O+ [% b+ A
$ e: \! k& Y7 D6 w6 R' L0 S H表1 最小采样点数目
# u* q' _# r8 y" Z
) ^" S7 F! [; G3 i! ^& }* k4 ?8 {面积7 J* i* ]# ^8 O. e# T3 A+ b
m2 洁净度级别
. c$ V9 y3 M/ }9 | 100 10,000 100,000 300,000. \3 K# s0 i+ n4 n" t
<10 2~3 2 2 22 \4 E- U2 e8 Q
≥10~<20 4 2 2 2
) C8 ]3 w @% r/ W≥20~<40 8 2 2 2+ W- m% Y. P- c0 t. A
≥40~<100 16 4 2 24 w# ^" F# b+ l' T$ [& ]# Q5 G& b
≥100~<200 40 10 3 2- Z# I# u' N8 O* M
注:表中的面积,对于单向流洁净室,指的是送风面积;对非单向流洁净室,指的是房间面积。0 Q" b8 G6 c$ I8 O5 U% B1 u2 G
表2 最少培养皿数
0 ^/ G. j, l4 w }# @ b5 Z洁净度级别 所需Φ90mm培养皿数
" t* I! `" |6 ~( F$ W! ?) |100 14
& O1 b4 x' r2 C2 {6 ?10,000 20 b% Q( [8 P7 ~3 N' u
100,000 26 a) v# W8 N+ [8 c
300,000 2. x. Z& m; K5 v/ r
3.5.2 采样点的位置2 Q7 m Q* b7 U6 V3 [! X) f7 e5 g
3.5.2.1工作区采样点的位置离地0.8~1.5m左右(略高于工作面)。
& [9 H1 q) v0 C0 j5 T3.5.2.2 可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
: X7 U0 o& ~1 v% }& P. U1 v' F t3.6 记录:测试报告中应记录房间温度、相对湿度及测试状态。
1 n- c+ f# G' O) W3.7 结果计算! g5 t' N: x' \' A
3.7.1 用计数方法得出各个培养皿的菌落数.( D0 X' l! _/ p8 j( ?. ]( A
3.7.2平均菌落数的计算:
4 K; n/ }: q+ K |; i, h( A$ Q平均菌落数=(M1+M2+…Mn)/n % V& R0 K4 E& x5 c- x
式中: M1 — 1号培养皿菌落数
& |$ {/ Z3 l2 T% S: F# J( N( o M2 — 2号培养皿菌落数 ^$ Y' Z0 l1 s, ?, ^3 V
Mn — n号培养皿菌落数 B& g: Y4 M9 b3 T
n — 培养皿总数。
: X7 L( j' ^. s. F2 ?: o3.8 结果判定0 V9 |' a, A% |/ |& @" g' N
用平均菌落数判断洁净室(区)空气中的微生物数。# C& u0 s, q. w( ?( N: |
3.8.1洁净室(区)内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。3 S2 I5 j3 D9 n7 V x$ |4 C0 r
3.8.2若某洁净室(区)内的平均菌落数超过评定标准,则必须对此区域先进行消毒,然后重新采样两次,测试结果均需合格。$ L4 \( N b1 v/ N( a# v
0 d$ f( ^6 d" S+ _) `# l附录
+ _% R" |# n/ t' c: G" `3 P" y培养基的准备及灭菌
. l% m. R4 v/ k# m7 Z1. 培养基的准备1 p9 U% X6 B* N: m
营养琼脂培养基可以外购或自行配制。自行配制方法见YY/T018 6-1995第6章无菌检查部分中关于此类培养基的配制和操作步骤。其他符合药典灵敏度要求的培养基亦可自行配制。
! V u& s! z5 A& Q+ ^: v2 I2. 营养琼脂培养基平皿的准备. [6 s% ?" ?( ~7 t
2.1 将培养皿置于121℃湿热灭菌20min或180℃干热灭菌2h。
3 g" v/ m" _9 e) v J2.2 称取适量培养基于三角瓶中,加相应数量水加热使营养琼脂培养基溶解,用牛皮纸包扎,置于121℃湿热灭菌20min,冷却至45℃,在无菌操作要求下将培养基注入培养皿。每皿约15ml。
/ f+ D+ h8 e$ B5 C! C" Q2.3 待琼脂凝固后,将培养基平皿倒置于30℃~35℃的恒温培养箱中培养48h,若培养皿基平皿上确无菌落生长,即可供采样用。; x' b. F+ \7 W0 t* u
注:培养基平皿宜在2℃~8℃的环境中存放。 |
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