微生物发酵过程的问题 代谢分析

gl19860312

本人目前在做微生物发酵过程中的代谢研究
基于之前做实验的处理步骤，我感觉有些疑惑，希望大家不吝赐教，非常感谢！

问题是这样的，在进行发酵液的采集之后，对发酵液中的成分进行分析的时候，是不是必须经过灭菌这个前处理步骤，我目前都是采用这个方法，但是我担心在灭菌后发酵液中的成分是否会出现变化？

还有如果不进行灭菌处理，进行有机提取后分析是不是会更准确？

gl19860312

这个提取物首先界定是 你的异黄酮类的衍生物或其他，
而不是ATP、NADPH或柠檬酸。

这样大家才知道你不是测定胞内代谢物（代谢组学相关），
而只是想弄明白异黄酮类物质的催化转化过程中都有哪些 中间体。

胞内此类中间体其实可以直接用氯仿常温抽提菌丝体。

如果你的条件更好的话，最好是按以下的抽滤方法进行，速度要比离心还快。
1.发酵液，例如50ml 或更多，抽滤，滤液做胞外分析用。
2.菌丝体也是抽滤获得，速度比离心更快的。
3.将菌丝体刮下来，置于干净的研钵中，倒入适量液氮，研磨。
4.破碎的菌丝体用甲醇（方便上HPLC）常温抽提，实在不行，也可以用氯仿抽提。
总之，胞内的物质可能溶于甲醇，也可能溶解很少，只能用氯仿了。

抽提过程就是：常温往复震荡，一般几个小时到一晚上，都可！

5.抽提液一般置于室温，问题不大。但注意不要泄露有机溶剂。

6.抽提液在静置一晚上后，几乎可以直接上HPLC柱，这是因为你只用取最澄清的500-1000 uL足够分析用了。

或者用0.22的耐有机溶剂的过滤器再过滤下，就可以。

7.如果代谢物浓度过低，就加大菌丝体量啊！如果还是少，那就只能选择取 n毫升抽提液去旋转蒸发或者真空抽干了。

gl19860312

灭菌的一个目的应该是杀死活微生物，终结发酵反应；另一个目的应该是对发酵液进行的分离纯化前的预处理，一般你的目标产物是热稳定性的话，可以这么做！另外，像你这样分析所有代谢产物，我觉得应该采用别的预处理方法，比如离心、过滤等等，这样对一些热不稳定的代谢产物影响应该就少一些！