厦门大学生命科学教学实验中心贵重仪器操作规程

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一、凝胶成像系统操作规则
4 u! g& x9 G; P- v' d2 ^凝胶成像系统统一UVP（GDS8000）是目前最新型的图象拍摄、分析和处理系统。广泛应用于DNA凝胶，蛋白质凝胶，X—光片，细菌平板等的扫描和分析。为保证本系统正常工作，请使用者严格遵守以下操作规则。
1、在熟悉仪器的基本性能和相关老师的指导下，开机使用。
! P5 L  i! f# N6 b' V. G2、仪器操作规程：
用酒精棉球将暗盒中的透视屏擦拭干净→
5 J$ B) g8 V$ z* A8 y- r( S  P将凝胶置于屏上（蛋白凝胶于白光屏，核酸凝胶于紫外屏）→
调整CCD位置使凝胶置于视野合适位置后插上电源→
4 J0 L, ]8 M8 ?* R  I" _  K打开电脑进入Labwork工作状态→
. G- O! {  @  ]& t% O+ Z9 R打开相应的透射光源准备扫描→
进入摄像状态，调整光圈和焦距扫描→
: n$ r! f! V- N& ~6 R% T用JPG格式文件保存图像→
关闭光源，CCD电源和电脑→
7 X* |7 m: A( R# y4 w1 u( X# o' E7 C取出凝胶并用酒精棉球擦净透视屏→
盖上防尘盖
7 O8 P! d; z( O+ }+ u+ V3、注意DNA凝胶含有EB，操作时应戴手套。并防止EB污染。
0 Z" x( _6 [5 |4、使用完后请在记录本上登记。
9 f! c, W3 ]# [+ T& q5 Q$ {# x5、凝胶成像系统电脑为图像扫描分析专用，不得作其它用途，不得修改电脑设置。
  Y( y1 V& ~7 `! a二、紫外分光光度计UV310操作规则
一、打开电脑（密码bbl），打开桌面的Vision32软件；
选定测定方法(如Fix、Scan等，原始设定为Fix方法)，并设定好各项测定指标。具体设定步骤看Fix、Scan等的使用方法。
二、开主机
打开UV310主机开关（机器左后侧），等机器自动检测完成后，点击确定（有英文提示）。
三、单波长测定需做对照调零实验，方法如下：
把盛有对照液体的微量杯放在主机Sample（左）槽，然后点击电脑软件Comand（第一行右4个），读OD值（Fix方法）点击Zero，扫描（Scan方法）点击Baseline，然后把装有样品的微量杯放入Sample（左）槽。
" C! m% @1 y' F6 E9 e( X. _' L注：如样品量超过400ul，可用双波长测定（同时使用2个400ul微量杯，不必调零，只需做对照实验，即把对照杯放在主机Reference（右）槽，样品杯放在Sample（左）槽，就可以直接测定了。
& z; H; w" Y+ z1 V# t- P! @四、测定完样品后，需转到本机控制状态。
方法：点击Comand →Local Control，直到主机显示屏出现完整信息。（有时主机显示屏会提示需按主机的HOME键，请按HOME键）。
& |9 H: E$ Z% Y/ ^3 L# j( N五、关Vision32软件，提示“是、否”保存，请点击“否”。
# |" x( O  \( n, X六、关主机后关电脑。
% R6 j8 Y( ^1 K0 A/ u2 z七、用蒸馏水和无水酒精清洗杯子。
3 \7 m$ D3 V. }! N* ^, g八、使用完仪器，请在登记本上登记使用情况。
特别注意：在主机样品槽取放杯子时，必须先拉开样品槽的活动杆，放完杯子再靠紧，防止擦伤杯子的表面。
三、细菌自动鉴定系统操作规则
6 I; L$ m+ {1 W（一）组成：
1、 软件
# {: c  }) [% F; [& j! M2、 判读器
, B9 Q& x5 V! R5 x' ^3、 鉴定版（6类）
NH 奈瑟氏/嗜血杆菌 3.0麦氏浊度 35～37℃ 孵育4小时
GP 革兰氏阳性菌 0.5麦氏浊度 35～37℃ 孵育18～24小时
RGP 快速革兰氏阳性菌 2.0麦氏浊度 35～37℃ 孵育4小时
ANR 厌氧菌 4.0-5.0麦氏浊度 35～37℃ 孵育4小时
ENF 肠/非发酵菌 0.5麦氏浊度 35～37℃ 孵育18～20小时
1 z" G; \3 I+ y8 A: K' BRSE 快速粪/肠菌 0.5-1.0麦氏浊度 35～37℃ 孵育3小时
3 U1 X4 i/ o$ Q3 x4、 培养液：不同的鉴定版配有不同的培养液
5、 比浊器（包括2根标准管）
6 u; ]; L5 |8 G: k（二）原理
根据不同的鉴定版各个孔中底物与细菌代谢产物的颜色反应不同，通过判读器读出一个代码，再从菌库中搜索出与之相符合的细菌。
（三）操作
' G0 a4 ~0 B6 k/ x- S  c$ z1、 比浊器：标准管培养液的标定（做演示）
2、 根据不同的细菌鉴定版对菌液比浊度的要求加好细菌（如上所示）。
3、 把菌液倒入鉴定版，充满每个孔，盖上有反应底物的盖子。
4、 立刻放入非CO2 35-37OC，湿度40-60%的孵育箱孵育。孵育时间如上所示。
5、 按时取出鉴定板，立刻判读结果。如果暂时无法判读结果。放鉴定板于2～8℃冰箱。
（四）注意事项：
􀂅 应使用新鲜菌落（菌龄小于24小时）
# i( U! f3 A) j* @- u5 }% j8 h- u2 R1 `9 U􀂅 使用单个菌落配制菌悬液。90%以上的鉴定错误或无鉴定结果是由细菌不纯引起。
8 a* W. H* d5 _$ L􀂅 不同的鉴定板需配置特定的菌液浓度。
: c6 D8 i+ C" o7 H- ^􀂅 配制菌悬液不能使用人造纤维棉棒。
􀂅 鉴定板起封后，1小时内使用。
3 \- `/ `, h5 \4 \; h. E􀂅 已装有标本的检测板5分钟内放入孵育箱。
5 B# j$ Z( l# ^* ^3 r% W1 Z' L- A9 X% }$ G􀂅 检测板孵育时，重叠不超过两层。
! G% m( E; s0 ?, R􀂅 孵育完成需尽快将鉴定板从温箱中取出，不能超过规定孵育时间。（可提前不能延后）。
, r8 S# A2 c& E  a1 y' i3 W􀂅 及时读板，否则放入冰箱。
􀂅 每种鉴定板只能鉴定其菌种库中包含的细菌种类。所以选择鉴定板前，请仔细阅读各鉴定板的鉴定菌种库。
, V& |" R8 t+ v" U5 O  l􀂅 注意各鉴定板的特点和局限。
; A) L! h7 T' M# o) ^  d四、冷冻切片机（CM1900）操作规则
一、控制键盘说明
样品头速制冷温度显示 箱体温度显示 时间显示
+ ~& P6 K0 F/ W) o（主键盘图）
: I1 U. L$ ^7 O9 @+ D2 L& t样品头设为最低温度按钮 样品头温度设置按钮 设置箱体温度按钮 设置基准时间按钮
  Q7 y1 b. g% I1 M3 n8 _! C设置除霜时间按钮 手动除霜开关 灯开关 锁定开关
样品头快退按钮，按下一次后样品头一直退到限位处
, e+ ^0 @1 E: A6 ~; {样
品 按住时样品头向后退，松开即停止
0 e* O$ W# m4 I0 K头
控 样品头快进按钮，按住时样品头才快速向前进
制
0 w% t$ m, G/ R  N图 可用于修片
$ D" ~8 b( G# [; |; ^二、调节部分
/ |! u. t9 t; o2 J1、切片厚度调节旋钮；
2、调节切片平面的旋钮，松开后可调节切片平面，切片时要拧紧；
" v* P8 k9 t$ t0 f, H8 k3、夹紧样品托的旋钮；
4、调节切削刀口的压杆，松开后，刀架可左右移动，选择切片刀口；
5、调节切片角度的压杆，松开后可调节切片角度，右侧有角度指示；
6、刀座夹紧压杆，松开后刀座可前后移动；
7、防卷板上下移动旋钮，移动时防卷板要离开刀刃；
* F' Q8 r% v+ a  d8、装卸刀片压杆。
# J. g# [0 I* I7 T( q" _（内部结构图）
( D3 o" s0 }0 x* I三、操作说明
（一）开机
/ Q: {( i# }0 g1、 利用主机右侧的开关开启电源，用箱体温度设置按钮将切片机温度设置到切片所需温度，当设置温度时温度显示窗口显示设置温度，设置停止5秒后显示实际温度。只要按
下箱体温度设置按钮，即可随时检查设置温度。样品头温度设置按同样方法进行。若样品头设为最低温度（-50度），则按样品头最低温度设置按钮即可。
, x7 n6 I  E' s% F& {5 \7 X+ x2、 第一次开机利用基准时间设置按钮设置一个基准时间，一般为北京时间，利用除霜时间设置按钮设置一除霜时间，一般为晚上12时左右，如果在该时间切片，应将时间推迟，当设置除霜时，时间显示窗口显示除霜时间，5秒后显示基准时间。手动除霜时先按下手动除霜按钮，听到峰鸣音后，按箱体温度设置按钮，则箱体手动除霜；如按箱体温度设置按钮，箱体手动除霜，按此顺序再按一次可关闭手动除霜，如按样品头温度设置按钮，则样品头除霜，按此顺序在按一次关闭。
0 T+ B  e8 H* n/ R  ]" K; c（二）切片
1、 利用切片机的厚度调节旋钮调节切片厚度，调整切片角度，安装切片刀。如是一次性刀片，请利用刀架的左右移动来使用不同的刀口，勿移动刀片。
2、 将样品放到样品托上，利用包埋剂固定，放到冷台上冷冻，在即将完全冷透前用热交换装置压平。
' P5 t, \3 b& T; s! ?* K8 j3、 将冷却透的样品放到样品头上，设置样品头温度，用样品快进按钮将样品移近刀口，调整要切的平面，利用慢进按钮开始修片，修好后即可放下防卷板切片，如有需要可调节防卷板的上下位置，使切出的样品平整的进入防卷板与刀片的狭缝，取出后染色观察。
" u; }: J! ]. N6 @' u5 a7 r（三）注意事项
1、 切片后为防止别人改变参数，可利用控制面板上的键盘锁定按钮将键盘锁定，即按下键盘锁定按钮5秒钟左右，时间窗口中间的两个点停止闪烁，表示键盘锁定，此时再按键盘锁定按钮5秒钟即可解除键盘锁定。
2、 当停机时，应将玻璃窗打开，再次开机前应先检查切片机内是否有水，如有应吹干后再开机，并取出隔板检查切片机箱体底部是否有水，如有需拔开底部的塞子，将水排除，吹干后再开机。
3、 如常年开机，夜晚可将切片机温度设到零下十度以下，不能高于零下十度。由于切片机冷却到工作温度大约需要两个小时，如关机后第二天有样品，应提前一天开机制冷，以免影响第二天的工作。
4、 若要关闭压缩机，按一下锁定开关，再按一下样品头温度设置按钮，则样品头压缩机关闭，若按箱体温度设置按钮则箱体压缩机关闭，重复以上步骤，压缩机又打开。
' \5 ]) m0 n( E6 s  ?五、Motic数码互动显微镜系统操作规则
1 h! \: f! ]8 `  d( W+ t1．打开显微镜的电源开关（背后），适当调整底座上的亮度，调节手轮（右
) C  Q. P' |3 ]$ y$ |- J手侧），此时底座内灯亮。
5 J+ s9 V' S& f, n! \2．按住电源开关旁边的红色按钮，打开CCD电源。
3．将显微镜头部上的拉杆拉出至最后一档，此时，显微镜处于即可目视观
察又可进行CCD摄影状态。学生显微镜中的视野出现在教师的服务器中。
/ W+ H, o% R* `. f, I  A  k- R" W4．轻轻旋转显微镜头部左手侧外圈旋钮，视场中出现光标。可通过外圈旋
钮调整光标亮度。内圈手轮摆动调整光标方向。
5．将聚光镜调至最高点，成象效果最佳。按常规操作方法，将显微镜调整
, @# \% h) e' ~# ]在正常工作状态。
2 p& x# U; E$ n) E5 Y6．使用完毕，调节亮度手轮至最小，关掉显微镜电源。
' r8 v: n6 O) r9 A5 L- T7．认真做好使用记录。
六、发酵罐操作规则
1． 灭菌前必须将夹套注满水
+ ^* _* W4 d& N6 V  E2． 灭菌前必须用铝箔纸包裹发酵罐顶端的电极（PH电极、氧电极）及
% O* o5 G; W( G3 X) S搅拌轴
/ h) K9 t& ?% m7 v* ~3 ?+ x2 s3． 灭菌锅使用前也必须加水
* S3 ]3 I4 L9 R! B8 {4． 每灭菌30分钟会损失约100ml的培养基，里面的培养液不能超过总体积的80%
5． 灭菌前必须用止水夹夹紧连接酸碱瓶与发酵罐的橡皮软管和取样橡皮软管
6． 发酵过程中要在老师的指导下进行
7． 发酵罐在使用一段时间后要重新校正PH电极和氧电极
1 K5 s: z+ a. F! f' M- v8． 发酵罐长期不用时要将罐内注满无菌水以保护电极
% N( x  E  C9 Z5 V, Z/ B9． 如果使用过程中出现异常情况必须马上向管理老师汇报
, K2 b  w' B4 @% U" C  B10．每次使用必须登记使用者姓名和时间
七、蛋白质纯化系统操作规则
. e5 d' [+ t/ s- A5 u6 e9 s1． 首先，依次打开主机、收集器、电脑的电源开关。
  D% c- n: K/ {& F2 y7 _2． 要确保柱子连接到系统上，柱子的输入管道应和输出管道相连。
8 b1 {& t# h5 c: t' X0 \' |( i3． 要核实所有的缓冲液入口端都浸入缓冲液中。
4． 当打开主机后，系统会自动显示泵操作的手动模式，要核实液体流向箭头是指向右边的。
5． 按下purge 键以最大流速跑泵，以清洗所有管道。
6． 此系统有三种操作模式：manual mode ,program mode ,run mode 。
7． 使用manual时，从模式键上选择manual键，再从仪表键上选择pump。
- w) K9 J$ e& Y$ S1 B% _% p. b8． 使用program时，从模式键上选择program键，显示屏显示当前所打开的方法，在这里，你可以根据需要编制新的方法。
& ]( |6 h9 K- r3 V! k9． 当确定一种模式后，就要根据需要输入合适的流速，过柱前，要先将uv检测器调零。
10．使用完毕后，用1M氢氧化钠或者2%的乙醇以1ml/min的流速清洗半小时，再用蒸馏水清洗。
0 `& x+ v& l; c7 r! `- [) R: I11． 关掉主机开关，再关软件和电脑。
: B- m3 D( s3 L. ?7 S12． 使用后要登记使用者姓名和时间