染菌问题

lwdfjw

(8076321) 21:38:50
又污染了一罐,郁闷
(160235453) 21:41:51
染了很多次吗？
(8076321) 21:42:02
最近经常
(160235453) 21:42:27
常染要找原因了
(8076321) 21:42:39
这次挺奇怪,染菌后PH值会上升,大家分析可能是什么菌?
(160235453) 21:43:11
见过一次
(8076321) 21:43:56
这个菌长得不算快,显微镜(低倍)下也看不见,还不耗葡萄糖
(8076321) 21:44:38
真菌吧,也没看见丝状的菌丝,
(160235453) 21:45:12
产氨水的细菌
(160235453) 21:45:25
有见沉淀吗
(8076321) 21:45:30
我也这么想,
(8076321) 21:45:40
有沉淀,
(160235453) 21:45:57
就是玻璃上有没有见变脏了或者模糊了
(160235453) 21:46:10
细菌在生产尿素呢
(160235453) 21:47:06
最近染菌的几率是多少?
(8076321) 21:47:09
不明显,就是培养液变浊了,镜下看到沉淀聚集,但未看到细菌形态
(8076321) 21:47:31
上次染丝状真菌,
(160235453) 21:47:40
http://www.studa.net/huanjing/060310/09544073-2.html
(8076321) 21:47:42
三罐有两罐了
(160235453) 21:48:17
要不检查你的罐，要不检查你的环境，不然以后可能会继续，除非这两次是偶然
(8076321) 21:48:18
水箱中水的电化学法处理?
(160235453) 21:49:03
铁细菌和硫磺菌
(8076321) 21:49:32
不会吧,这种菌环境中不多吧?
(160235453) 21:49:33
不是要你看电化学处理，让你看什么细菌会让pH上升
(160235453) 21:50:12
除非你偶然的机会太多，不然你的东西肯定哪里出问题了
(8076321) 21:50:34
我把发酵液接到无菌实验的琼脂中,两天才长出透明的小菌落,
(8076321) 21:50:56
发酵罐染菌3天后,细胞活力还很高,
(160235453) 21:51:28
他们长大速度很慢，耗氧少
(160235453) 21:51:44
耗氧快递细菌不可能pH上升
(8076321) 21:51:55
耗氧也很少,
(160235453) 21:52:05
是这样子的
(8076321) 21:52:21
还一直以为可能是真菌,真菌有时也会PH上升
(160235453) 21:52:30
你们房间里的下水道是开着还是密封的？
(8076321) 21:52:45
密封的,
(160235453) 21:52:56
真菌细菌都有，代谢途径不一样，结果不一样
(160235453) 21:53:15
两次发现染菌都是什么时间？
(160235453) 21:53:23
一样的还是不一样的？
(8076321) 21:53:29
不一样,
(160235453) 21:53:50
pH上升到是多长时间，下降的多长时间？
(8076321) 21:54:09
上次是真菌,看到丝状体,这次镜检下除了絮状物,看不到菌体
(8076321) 21:54:27
PH一直是上升的
(160235453) 21:54:31
是不是还是漂浮起来一大块一大块的？
(160235453) 21:55:03
时间分别是接种后多长？
(8076321) 21:55:09
没有,没有漂浮物,镜检下才能看到有沉淀,
(8076321) 21:55:30
接种后7天左右吧
(160235453) 21:55:38
那跟我以前看到的不一样，不多细菌各种各样都有
(160235453) 21:56:12
你镜鉴用几倍显微镜，一般大肠杆菌用400倍能看到的
(8076321) 21:56:20
一般的菌污染还镜检下能看到小亮点,
(8076321) 21:56:31
这次看不到,
(160235453) 21:56:40
我是用一般显微镜，看到小黑点
(8076321) 21:56:41
我物镜用20倍的,
(160235453) 21:57:15
七天，那可能是后期操作的原因了
(8076321) 21:57:27
目镜可能10多倍吧,olympusCK41
(8076321) 21:57:58
从来没染过这种菌,
(160235453) 21:58:18
第四、第五天你有什么操作？
(8076321) 21:58:21
长得这么慢,环境中应该也不多才是
(8076321) 21:58:29
就是取样,
(160235453) 21:58:49
你是玻璃罐还是不锈钢罐？
(8076321) 21:59:13
玻璃罐,
(160235453) 21:59:22
取的样有没有做无菌实验？
(160235453) 21:59:45
用什么方法取样？原配的针筒吗？
(8076321) 22:00:23
接种不锈钢罐后,第二天发现种子罐和不锈钢都染了,分析是种子罐先染,
(160235453) 22:00:53
不对，应该是连接环节了
(8076321) 22:01:15
用贝朗的那个玻璃小装置,
(8076321) 22:01:27
那不可能两个都染吧?
(160235453) 22:01:40
有可能的
(160235453) 22:01:55
接种的时候有没有倒吸？
(160235453) 22:02:10
你是用什么快接头？
(160235453) 22:02:22
NBS的玻璃还是贝朗的不锈钢？
(8076321) 22:02:39
我用玻璃的,
(8076321) 22:03:01
贝朗的不锈钢的好用么?我买了一些,还没用
(160235453) 22:03:20
接种完后你是留一部分在小罐吧，中间硅胶管里那部分你怎么处理？
(160235453) 22:03:31
贝朗的也不大好用，各有优缺点
(8076321) 22:03:51
可能倒吸回去了
(8076321) 22:04:22
可大罐我已经做了两天空培了,不会有问题
(160235453) 22:04:33
可能是快接头的问题了，如果不是这里的问题，那就是你太倒霉，在接种前两天的操作染了
(160235453) 22:05:13
你接种前最后一次的取样有没有做无菌试验？
(160235453) 22:05:28
我相信大罐原来没有问题
(8076321) 22:05:52
我取样是取小罐的,用来每天计数,?还要用来做无菌?

lwdfjw

(160235453) 22:06:36
取样过程保证无菌，放一点到瓶子里放培养箱就可以了
(160235453) 22:07:15
倒吸的时候是直接把快接头拆开，倒吸空气进去吗
(160235453) 22:07:34
无菌试验不需要老做平板的
(8076321) 22:07:39
如果是普通细菌或者是真菌,我觉得是操作原因,主要是这次染的菌环境中应该也很少见,
(8076321) 22:07:54
倒吸的时候是这样的,
(160235453) 22:08:08
这种细菌存在人身上的可能性比较大

lwdfjw

(8076321) 22:08:23
极有可能,
(8076321) 22:09:05
这种菌只可能生活在营养丰富或者条件很合适的环境中,
(8076321) 22:09:17
很可能就是人体中
(160235453) 22:09:39
建议你其中一个快接头接个三通，结果空气过滤器，一起灭菌，接种的时候先把硅胶管夹死，别让液体流过过滤器，你要把液体回流的时候，用空气通过过滤器把它压回去，这样会好一点
(8076321) 22:09:55
因为他不耗糖,只消耗氨基酸
(160235453) 22:10:01
是啊
(160235453) 22:10:21
任何时候都尽量避免把环境中的空气吸回去
(160235453) 22:11:08
不是说环境不好，是因为液体更容易吸附空气中的颗粒

lwdfjw

(8076321) 22:12:07
我这样操作的时候,回流的时候,空气也是通过空气滤器的,
(160235453) 22:13:18
是吗，那就奇怪了
(8076321) 22:13:50
每天的细胞计数,你们一般都用什么样的取样方法
(160235453) 22:14:51
血球计数板,我很少取样的
(8076321) 22:15:25
不取样,你如何监测细胞密度?
(160235453) 22:16:01
一般看看也差不多知道的了，只是到了关键的接种前才取样看看

lwdfjw

(8076321) 22:18:09
每次取样做无菌实验,不太明白,因为取样我一般是计算细胞密度的,取出的样需要做无菌实验么?即使有菌能说明什么问题呢?
(160235453) 22:18:19
看着玻璃一定面积，单位时间流过的细胞数量，凭经验可以知道个大概，当然不是很准了
(160235453) 22:19:19
你现在是出了问题，不确定是种子罐染还是连接染，才要这样做，没问题我也不想干这个
(8076321) 22:19:31
经验确实够丰富才行,
(160235453) 22:22:10
刚才忘了个问题，你用什么方法取样的？
(8076321) 22:22:17
不知道其他人都是怎么做的,我是每天都取样的,确也是个污染的途径,
(160235453) 22:22:38
是那个针筒装置吗？
(8076321) 22:23:16
嗯,用个那贝朗玻璃罐的针筒装置,我觉得挺白痴的
(160235453) 22:23:34
最好不要用它
(8076321) 22:23:34
但也没有更好的方法,
(8076321) 22:23:44
那用什么?有更好的?
(160235453) 22:23:56
做微生物发酵还凑合，做细胞基本上是不好
(8076321) 22:24:01
给介绍下,
(160235453) 22:24:10
我用蓝盖瓶
(8076321) 22:24:36
没听说过,给介绍下,
Bush(79179529) 22:24:43
用蠕动泵，
(160235453) 22:24:46
当然了，你现在的蓝盖瓶只有贝朗的不锈钢头是不是？
(8076321) 22:25:34
什么意思?我不知道蓝盖瓶是什么东东
(8076321) 22:25:49
bush用蠕动泵来取样?
(160235453) 22:25:50
我用胶塞，上面有2个洞，一个洞接过滤器，一个洞接硅胶管到罐子上，空气打过来，在超净台下打开蓝盖瓶，换个新的
(160235453) 22:25:53
不是
(160235453) 22:26:31

(160235453) 22:27:27
你的玻璃罐不是也配了几个补料瓶吗
(160235453) 22:28:02
那个就是，不过贝朗的红盖上面配对是不锈钢，下面是硅胶片密封，一打开硅胶片就往下掉，不好用
(8076321) 22:28:13
每次换个蓝瓶,那蓝瓶不是每次都要和玻璃罐来切换连接么?
(160235453) 22:28:23
不需要啊
Bush(79179529) 22:28:31

(160235453) 22:28:54
你一根硅胶管连到超净台里面，每次换一个灭过菌的瓶子
(8076321) 22:30:29
每次换个瓶,对吧?
(160235453) 22:30:35
对啊
(160235453) 22:31:11
你现在的针筒是在什么环境下取的，百级？
(8076321) 22:31:13
我明白了,超净台要在罐子的附近才行,
(160235453) 22:31:25
对
(8076321) 22:31:44
我就在普通条件下,万级洁净区,
(160235453) 22:32:01
呵呵，见仁见智啦
(8076321) 22:32:46
我以前也用bush的方法,现在贝朗的罐上的泵不能随意开,所以用空气打,有点悬,
(160235453) 22:32:50
要不你把贝朗的针筒接跟长硅胶管到超净台也比现在好点
(160235453) 22:33:10
我一直都用空气打
(8076321) 22:33:17
嗯,想办法改进一下,
(8076321) 22:33:48
bush的末端怎么处理,泡在酒精里么?
(160235453) 22:33:48
我可以寄一个胶塞给你用用
(8076321) 22:34:10
得有配套的瓶子才行,
(160235453) 22:34:18
你有点啊
(8076321) 22:34:38
还有你说的,贝朗的那个瓶盖确实难用,
(160235453) 22:34:54
你有的，贝朗的补料瓶就是，不过你得用一个红盖，就是中间有洞的那种
(8076321) 22:35:16
那怎么好意思,我又没什么东西送你,
(160235453) 22:35:21
你有他的盖子就行，我寄个胶塞给你，把你的地址发给我
(160235453) 22:35:32
没关系的，我自己定做的
(8076321) 22:35:44
好的,