为什么我白介素发酵2-3小时左右菌体就停止生长了

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闹市俗人(228549624) 15:33:13
各位高人 我这出现一个问题 请知道的人帮忙讲下

我发酵的时候 每次在上罐后2-3小时左右菌体就停止生长了，
初期表现为 溶氧上升
继续培养2.5小时 OD值没有下降
现在应该排除噬菌体
因为OD没有下降
一直就是这样 没有变化
我最长培养到3小时 OD不下降一部上升
溶氧一直停在97%左右不动
看看是啥原因？？

lwdfjw

中国发酵同盟(湖北群) - 会飞的鱼儿(46890484)
噬菌体。。。

这个时候还是噬菌体的潜伏期。你按照正常培养时间再多培养几个小时看看。  
3个小时根本看不出什么问题的  
做个噬菌斑实验

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闹市俗人(228549624) 15:38:38
有没有可能是什么原因让大肠杆菌JM109菌体停止生长了，比如宿主菌老化或者传代过多

lwdfjw

中国发酵同盟(湖北群) - 会飞的鱼儿(46890484)
就算你的菌种老化了，再接到新的培养基里就可以复壮了啊

lwdfjw

老虎爱吃草(283948182) 15:40:34
重新克隆 应该能解决
宿主菌最好搞个原代的
做个克隆一个星期就搞出来了啊

lwdfjw

中国发酵同盟(湖北群) - 会飞的鱼儿(46890484)
建议你：
1、重新分离单菌落或者开启新的一支保藏的菌种。
2、把发酵罐彻底空消，特别是空气系统。
3、实验空间用84或者二氧化氯之类的来消毒。  

染杂菌了，最直接方式就是镜鉴

先培养一个平板，让上面长满你这个菌苔，然后把你的发酵液离心取上清30微升左右滴在菌苔上，培养几个小时，观察，如果滴了发酵液上清的地方有透明圈那就说明肯定是染噬菌体了

70417859

闹市俗人(228549624) 15:43:24
我用的是 甲醛熏蒸
镜鉴也做了 没有什么发现

我这是全厂公用的空压机
300L的 发酵罐
加了抗生素氨苄西林钠 10mg/ml

lwdfjw

老虎爱吃草(283948182) 15:48:23
是不是质粒丢失

质粒丢失它肯定就长不起来了
没有抗性

你取点发酵液摇瓶试试
看能不能长
如果能的话应该就不是

lwdfjw

中国发酵同盟(湖北群) - 会飞的鱼儿(46890484)
质粒丢失的话应该更容易长的

70417859

闹市俗人(228549624) 15:50:27
一级和二级都长得很好