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纸层析法
(1)层析纸的准备:裁取30 cm长、20 cm宽的新华3号滤纸,注意使滤纸的纤维方向与短边一致。在距滤纸长边边线2 cm处用铅笔画一直线,每隔2 cm设一点样点(共14个),写上点样标记。
(2)点样:用微量进样器将氨基酸标准液或已处理好的待测样品点在层析滤纸的相应点样点上,自然晾干或用电吹风吹干,点样斑点直径控制在4 mm内。
(3)展开:将点好样的滤纸置于装有约5 mm深展开剂的层析缸内,平衡1 h后放下滤纸,当展开剂前沿上行至距离滤纸顶端2 cm时取出滤纸,置于通风橱内风干。
(4)显色:用喉头喷雾器将层析纸上均匀喷上显色剂,于100 ℃恒温干燥箱内显色10 min。
纸层析法所用溶液
⑴ 纸层析系统展开剂:正丁醇∶冰醋酸∶水=4∶1∶2(体积比)。
⑵ 显色剂:准确称取2.5 g茚三酮溶液,溶于500 ml丙酮酸中。
⑶ 洗脱剂:CuSO4(0.1%)∶95%乙醇∶蒸馏水=5∶75∶20(体积比) |
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