SDS-PAGE胶浓缩分离问题

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发酵工艺探讨 - 张小琴(346244023)
SDS-PAGE胶，浓缩胶中有条带，分离胶中没有东西，都按步骤来的，现在不知道原因，想问下大家

发酵工艺探讨 - 竹林深处(594025710)
重做一遍

发酵工艺探讨 - 张小琴(346244023)
重做了4遍，都一样

工业微生物育种 -花园之丘(942010120)  14:56:30
电压多少

发酵工艺探讨 - 竹林深处(594025710)
更换分离胶的缓冲液
我们稳流跑电泳，

发酵工艺探讨 - 张小琴(346244023)
100v，浓缩；150v,分离

生物技术-发酵方向 - 梧桐雨(276567604)
换下电压试试

发酵工艺探讨 - 张小琴(346244023)
暑假时，跑的效果很好

工业微生物育种 -wuhuawei(476601565)  14:58:15
样品怎么处理的？这个很重要

发酵工艺探讨 - 张小琴(346244023)
跟2X溴酚蓝混合，沸水浴5分钟
2X上样缓冲液

发酵工艺探讨 - 竹林深处(594025710)
溴酚蓝跑进分离胶没啊

工业微生物育种 -wuhuawei(476601565)  14:59:43
煮沸后离心没有？

发酵工艺探讨 - 张小琴(346244023)
跑进了

发酵工艺探讨 - 张小琴(346244023)
都跑出了

发酵工艺探讨 - 竹林深处(594025710)
你的蛋白不会也跑出去了吧

发酵工艺探讨 - 张小琴(346244023)
没离心，都是现处理上样

工业微生物育种 -wuhuawei(476601565)  15:00:24
这就是问题
一定要离心
否则不溶物会堵塞你的加样孔
样品进不了胶里面
一定要离心除去不溶物
细胞碎片等

工业微生物育种 -wuhuawei(476601565)  15:01:39
根据我的经验，问题就在这

发酵工艺探讨 - 张小琴(346244023)
我也这么想，但mark都是这样，本有7条带，结果就浓缩胶里有三条，分离胶里没有

工业微生物育种 -wuhuawei(476601565)  15:02:03
一定要离心

发酵工艺探讨 - 张小琴(346244023)
这个，我试一下

工业微生物育种 -wuhuawei(476601565)  15:04:38
其他什么电压啦，稳流啦，肯定不是这个问题

发酵工艺探讨 - 竹林深处(594025710)
你在重新测一下你分离胶的8.8pH是否正确
wuhuawei(476601565)  15:04:57
我想她这个不是问题


发酵工艺探讨 - 张小琴(346244023)
嗯

工业微生物育种 -wuhuawei(476601565)  15:05:12
这么明显的问题一般不会出错
不是准备的8.8也可以的
附近，只要误差不太大都可以

没离心，加样孔堵住，蛋白质进入不了胶，就是这个问题，无它！

工业微生物育种 -wuhuawei(476601565)  15:11:02
我也遇到一个问题，大家帮我解答一下撒，困扰了我几天，我纯化一个蛋白质，DEAE-sepharose的离子填料，pH8.0 20mMTris-HcL,目的蛋白不结合柱子，试过9.0，也不行，是何原因？