还原糖的测定

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还原糖的测定
4.4.1 原理：
利用葡萄糖将二价铜还原成一价铜，在酸性条件下，过量的二价铜再用碘化钾还原析出碘，用硫代硫酸钠滴定，也即为碘量法。
4.4.2 试剂的配制
1) 斐林试剂：
甲液：称量CuSO4•5H2O 69.3g用水溶解并定容至1000ml。（如有不溶物，可用滤纸过滤）
乙液：称量346g酒石酸钾钠，100g氢氧化钠用水溶解并稀释至1000ml。
2) 碘化钾溶液：
称取166gKI用水溶解定容至1000ml，贮存棕色瓶中，避光保存。
3) 硫代硫酸钠溶液（0.1mol/L）：
称取25 gNa2S2O3•5H2O样品和0.2g 无水碳酸钠，溶于1000ml新鲜煮沸并冷却后的水中，定容至1000ml，贮存于棕色瓶中，放置7∽10天后标定。
4)硫酸溶液（2mol/L）：
量取109毫升浓H2SO4（ρ=1.84，98%）溶于水并定容至1000ml。
5) 淀粉指示剂（0.5%）：
称取0.5g可溶性淀粉，用少量水调匀，倾入80ml沸水中，继续煮沸至透明，冷却后用水定量100ml。
4.4.3实验步骤：
1.分别取5ml甲、乙液至250ml锥形瓶中，混匀。
2.取10ml发酵液至离心管中，以4000r/min离心5min，取1ml上层清液至锥形瓶中。
3.加20ml水至锥形瓶中，将瓶壁上液体冲洗下去。
4.将锥形瓶放在恒温电炉上加热至沸腾，煮沸2min，然后将锥形瓶放在冷水中快速冷却。
5.将冷却至室温的锥形瓶取出，加入5mlKI (1M)，10mlH2SO4(2M)，轻微振荡，混匀。
6.用0.1M Na2S2O3滴定液滴定至锥形瓶中溶液开始变灰白色时，再加10滴淀粉指示液，轻微摇匀，溶液呈蓝褐色，继续滴定至溶液变成灰白色则停止。
7.记录滴定前Na2S2O3的体积读数V0，停止滴定时Na2S2O3的体积读数V1。
4.4.4 计算
利用滴定标准的葡萄糖溶液计算出直线方程：
y=k×(a-x)     式中：
a，k为常数。（根据滴定标准葡萄糖溶液计算出）
x为滴定反应新消耗的Na2S2O3体积数（ml），即x=V1-V0
4.4.5 注意事项：
①锥形瓶加热前，电炉已加热至恒温。
②吸取甲液，发酵离心上层清液及KI要准确。
③出现砖红色沉淀后不要剧烈摇动，以免沉淀接触空气被氧化。
④锥形瓶内液体一定要等它冷却至室温，再进行下一步实验。
⑤用Na2S2O3滴定时，滴定速度要快。
⑥近滴定终点时，再加淀粉指示液。