广州市绿巨人生物环保技术有限公司基因工程脂肪酶

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　企业名称:广州市绿巨人生物环保技术有限公司

　　所属行业:生物工程

　　职工总人数(人)：21

　　在职人员：19

　　经营地址:广州科学城国际企业孵化器A503室 主营业务:基因工程脂肪酶

　　企业概况(包括资产及经营状况、比较优势、发展方向等):广州市绿巨人生物环保技术有限公司现在的注册资本为384.62万元，王进贤博士占股87%，广州国际企业孵化器占13%。公司成立初期开展的主要研究开发项目为香蕉、花卉和园林绿化植物组织培养种苗；基因工程酵母脂肪酶的研究和耐热性植酸酶在动物饲料中的应用等。根据当时的资金和项目技术成熟程度， 2000年至2002年度公司的资金和人力资源重点投放在香蕉、花卉与园林绿化植物组织培养种苗项目，与中山大学等单位合作，共同建造了植物组织培养工厂，先后研发生产和投放市场的农作物和花卉组织培养种苗30多种，取得一定的经济效益。与此同时，本企业开展环境与生态园林绿化的设计与施工业务，2000年至2002年期间先后承担了珠海市唐家镇的环境和园林绿化工程设计施工，中山大学珠海校区的园林绿化设计与施工，营业收入达380多万元，创利润100多万元。2003年始，公司根据业务发展方向和研究开发进展，将植物组织培养种苗和环境与生态园林绿化工程项目与有关单位合作经营，主要业务转向基因工程酵母脂肪酶和耐热性植酸酶高产菌株的研制及其推广应用。经过几年来的研究开发和经营运作，旨在开拓我国生物工程高新技术产品的广州市绿巨人生物环保技术有限公司正在逐步地发展和成长。

　　公司现有职工21人，其中研究开发和技术服务18人，财务和管理人员3人。 企业员工全部都是大专毕业以上学历，其中博士学位4人，硕士学位5人。研究开发的技术骨干包括企业专职的研究人员和产学研合作单位研究人员。公司总经理王进贤博士，1993年获得澳大利亚国立大学博士学位并在澳大利亚联邦科学和工业研究组织从事博士后研究三年，研究方向是应用生物工程技术。王博士曾经在澳大利亚上市公司BioLogic International Ltd 担任技术主管、亚洲项目总经理等职务，主持研究开发生物杀虫剂工艺流程，微生物发酵和制剂生产，与此同时在中国、菲律宾等国家从事生物工程技术项目的研究和开发，积累了丰富的技术产业化经验，具有良好的创新意识和开拓能力。

　　公司副总经理贝锦龙博士是“脂肪酶基因序列及其在酵母中的应用”专利技术的主要发明人，从事基因工程酵母脂肪酶的研究开发多年，具有丰富的项目研发经验；项目专职研究人员赵伟(发酵工程硕士研究生毕业)和廖均成(大学生物制品本科毕业)已从事本项目研究开发多年，具有良好的专业基础和突出的技术能力。

　　中山大学生物医药中心主任、博士生导师王珣章教授是本项目技术顾问和研发主持人，在主持和指导基因工程酵母脂肪酶项目科技攻关等方面做了大量富有成效的工作，亲自联系并与华南理工大学制浆造纸工程国家重点实验室建立了合作关系。王珣章教授指导的博士和硕士学位研究生中有多人从事基因工程酵母脂肪酶相关的研究。

　　到2007年12月底，本企业的资产规模已经超过500万元。基因工程酵母脂肪酶项目已按计划实现了吨级发酵的中试生产和产品销售，已经实现产品销售和推广应用收入210多万元(税前)，企业的财务状况良好。

　　产(股)权转让标的、项目内容简介:

　　基因工程酵母脂肪酶项目已经获得了国家知识产权局于2007年9月颁发的发明专利证书(ZL01 1 07441.8)，CRL基因工程菌标准菌株已送中国科学院典型培养物保藏中心保存。本技术转让标的为1800万元。

　　脂肪酶制剂在食品加工与保藏、轻化工产品以及医药等行业应用广泛。传统的生产方法主要是通过筛选和选育产脂肪酶菌株来进行，因而十分费时费力。近年来，随着基因工程和现代生物技术的迅猛发展，微生物酶制剂的开发也由传统技术向现代生物技术转变。本项目应用基因工程和蛋白质工程技术克隆和改造褶皱假丝酵母脂肪酶(Candida rugosa Lipase，简称CRL)基因，选用目前国际最先进的真核表达系统之一的毕赤巴斯德酵母表达系统用以表达CRL基因，使其在热稳定性、pH值环境适应性和高效分泌表达能力等方面有较大幅度改进。由于毕赤巴斯德酵母表达系统特别适合大规模发酵生产，从而为基因工程CRL的产业化奠定了基础。本项目通过对脂肪酶全长基因序列进行体外设计，采用基因合成技术，在我国首次获得了CRL的基因工程高产菌株。

　　造纸工业的树脂障碍是急待解决的一个关键技术问题。由于纸浆中的树脂沉积会严重地影响生产纸张的产量和质量，对于那些日产几百甚至上千吨的大型造纸厂，解决这一关键技术尤其重要。解决树脂障碍的常规方法是化学控制，通过化学处理来分散纸浆中的树脂。由于树脂控制效果不理想，经常导致停机、纸张穿洞和严重影响抽纸速度等问题，例如，广州造纸厂引进的高效抽纸机设计抽纸速度为1200-1300米/分钟，但实际出纸率为700-800米/分钟。常规树脂控制方法已经不能满足现代造纸工业的要求，如何进一步提高工艺技术水平，特别是高效地控制树脂障碍是造纸工业急需解决的关键技术。

　　脂肪酶(Lipase; E.C.3.1.1.3)是油脂水解酶，其底物一般为天然油脂，主要催化脂肪酸甘油三酯水解为脂肪酸和甘油。脂肪酶普遍存在于各种动植物组织以及许多微生物之中。由于微生物脂肪酶种类众多，具有比动植物脂肪酶更广的pH和温度作用范围，且又易于工业生产和获得高纯度制剂，加之微生物脂肪酶在酶理论研究方面亦有重要意义，因此，微生物脂肪酶的研究越来越引起人们的重视。近年来，脂肪酶制剂已在美国、德国、法国和日本等国家得到广泛的商业应用并取得良好的社会和经济效益。

　　脂肪酶水解甘油三酸酯是在水脂介面上特异性地将脂肪水解为脂肪酸和甘油，并在非水介质中催化逆反应。脂肪酶水解发生部位为甘油三酸酯的酯键，其催化反应如下：

　　脂肪酶

　　三酸甘油酯 ＋ 水 二酸甘油酯 ＋ 脂肪酸

　　上述反应还可以进行到单酸甘油酯，直至水解成甘油。脂肪酶在非水介质中还能催化酯化反应或改变酯键，在酯化反应和转酯反应中具有很高的专一性和相互选择性。

　　随着我国造纸工业的迅速发展，造纸设备性能日益提高，国家对造纸排放废水标准的逐步规范和重视，脂肪酶在我国造纸工业中的应用必将迅速发展。基因工程酵母脂肪酶高产菌株产酶活性高，性状稳定，易于培养生产。

　　CRL基因工程菌标准菌株已送中国典型培养物保藏中心保存；关键技术已向国家知识产权局申请了专利(2007年9月获得了发明专利证书ZL01 1 07441.8)。经过酶活力测定，该保藏菌株摇瓶培养水平上清液在PH为7.2,温度介乎30-40℃时的酶活力为3000 IU/ml；而在高密度发酵条件下，上清液的酶活力高达14000 IU/ml。本项目获得了产量高于原菌株20倍的CRL脂肪酶基因工程高产菌株，可显著地降低生产成本，使得其在造纸工业的应用成为可能，并且具有占领CRL原有市场的潜力。与国外CRL产品相比，本项目最终产品具有稳定性好，成分纯度高等特点。传统方法生产的CRL含有较多的蛋白酶，在水环境下会逐渐降解，而本创新技术项目的产品为基因工程产物，纯度高且不含有蛋白酶。实验表明其原初发酵液可以在30-40℃的温度条件下保存1个月而不发生明显的酶活力下降；因此本产品具有运输及保藏上的优越性。经华南理工大学制浆造纸工程国家重点实验室测试鉴定，本基因工程脂肪酶可降解纸浆中80%以上的甘油三酯，正在广州造纸厂推广应用。与此同时，本基因工程产品具有逐步开拓和占领CRL原有市场的潜力，随着生产规模的扩大和产品质量的稳定与提高，具有非常良好的商业前景。

　　项目可行性分析、市场分析、投资估算:

　　本项目根据微生物酶制剂的最新研究进展，结合我们在基因工程领域多年工作积累和经验来进行基因工程微生物脂肪酶的研制和开发，选取圆柱形假丝酵母脂肪酶基因为靶目标，这是因为近年来的研究显示产自圆柱形假丝酵母的脂肪酶具有非常好的应用前景、用途更为广泛并已成功应用于 (1) 食品和调味品工业(油脂加工、食品发酵、冰淇淋制造等)、(2) 单细胞蛋白的生产、(3) 制药(CRL可通过原位消旋作用产生光学纯的对映体，因此已被用于制造十分重要的药物，如光学活性的非固醇类抗炎药物ibuprofen、naproxen、ketoprofen，抗HIV的杀病毒剂，以及生物碱、仲醇、抗生素、生物化学抑制剂和药物前体的反特异合成)、(4) 糖酯合成(糖酯在精细化工制造业中具有十分重要的意义)、(5) 胺和酰胺类的生产、(6) 生物杀虫剂、(7) 生物传感器(CRL生物传感器不仅已成功精确检测了心血管疾病，而且在食品和饮料工业中杀虫剂污染检测以及制药行业等中也得到了实际应用)、(8) 废物生物处理(既可用纯CRL处理废物、也可直接将产CRL的酵母工程菌接种于废物中进行处理)、(9) 生物洗涤剂、(10) 制革业、(11) 化妆化妆品和香水业。由此可见研制基因工程CRL具有非常好的应用前景。

　　本项目应用基因工程和蛋白质工程技术克隆和改造CRL基因，选用目前国际最先进的真核表达系统之一的毕赤巴斯德酵母表达系统用以表达CRL基因，使其在热稳定性、pH值环境适应性(例如生物洗涤剂所要求的～60℃和pH7-11的碱性环境)、高效分泌表达能力等方面有较大幅度改进，并使CRL得到更充分的应用、产生更大的经济和社会效益。由于毕赤巴斯德酵母表达系统表达特别适合大规模发酵生产，从而为基因工程CRL的产业化奠定了基础。

　　本项目所获得的CRL酵母工程菌，除了发酵上清液用来制备基因工程CRL外，菌体本身则可作为饲料添加剂直接应用于畜牧业生产，其胞内残留的脂肪酶是良好的动物消化剂，而酵母本身可作为单细胞蛋白供动物吸收。因此，本项目所产生的成果和工艺将能得到最大限度的利用，从而进一步提高了经济效益、节约了能源。

　　本项目在国内首次获得了产量约为原菌株产量20倍高的CRL脂肪酶基因工程高产菌株。由于成本的降低使得其在造纸中的应用成为可能，并且具有占领CRL原有市场的巨大潜力。与国外CRL产品相比，本项目最终产品具有稳定性好，成分较纯等特点。传统生产方法下的CRL含有较多的蛋白酶，在水环境下可以逐渐降解脂肪酶，而本创新技术项目的产品为基因工程产物，纯度高且不含有蛋白酶。实验表明其原初发酵液可以在30-40℃的温度条件下保存1个月而不发生明显的酶活力下降；因此本产品具有运输及保藏上的优越性。

　　综上所述，由于本项目采用的是国际上最先进的技术路线和最优良的脂肪酶基因，因此技术水平应可达到国际先进水平，其成果在国内将不仅处于领先地位、且可填补国内在基因工程脂肪酶领域的空白。本项目的研究开发周期短，所产生的经济、社会和环境效益是极为显著的。

　　本项目产品主要用于造纸业中非化学机械浆与亚硫酸盐浆生产中的树脂控制。目前国内每年大约生产30-40万吨左右的非化学机械浆与亚硫酸盐浆，并且主要集中于5家较大的新闻纸厂，如广纸集团、南纸集团、江西纸业等。本项目产品在国内尚处于应用初期，尚无生产产家，国外也是近年才开始推广应用。项目产品的经济寿命期预计在10年以上，目前处于寿命期的起始阶段。本项目的基因工程脂肪酶及其在造纸工业上的应用技术属国内首创。目前尚无国内厂家生产本项目产品。国外在华销售产品主要有美国EDT公司的脂肪酶树脂控制剂和丹麦NOVO公司的Resinase A 2X。

　　本项目产品与国外产品相比，具有生产成本低等优越性。实验室培养生产试验证明，本技术创新CRL基因工程高产菌株比用传统方法获取的菌株其脂肪酶含量要高20倍，由此达到的价格优势对于低附加值的造纸行业来说，具有巨大的吸引力。只要本项目产品具有质量上的稳定性，以及价格上的优势，国内外可以占据市场。

　　根据我们初步的估算，投产一间年产800吨脂肪酶树脂控制剂的工厂总投资约为2000万元，主要设备包括50吨级发酵罐及其配套设施等。按此工业化生产规模计算的项目产品年生产成本如下：

　　生产费用

　　原材料 450万元

　　制造费 550万元(包括厂房和设备折旧)

　　人员工资福利 100万元(定员20人，平均每人年5万元计算)

　　其它 50 万元

　　合 计 1150 万元

　　期间费用

　　管理费(包括研发经费)：按销售收入15%计算，全年540万元(3600万元 * 15%)；

　　财务费用：拟向银行申请流动贷款300 万元，财务费用全年30 万元；

　　销售费用：根据行业实际按销售收入的8%计算，全年288万元；

　　合 计 858万元

　　年生产成本 1150 + 858 = 2008 万元

　　对受让/合作方的资质、技术水平、同业管理经验、规模、财务状况等要求

　　越高越好。

　　拟采取转让/合作方式:面议

　　是否参加洽谈会现场的PPT路演或项目推介:看情况