【求助】毕赤酵母发酵液中色素如何去除及纯化？

bxbio

本人用毕赤酵母GS115，载体pPIC9K表达目的基因。可发酵液颜色特深，硫酸氨沉淀后，几乎呈黑褐色，蛋白纯化仪是AKTA的，现在有点害怕上拄，请指教如何能去除色素？？
另外本人的表达蛋白预测等电点为 PI：5.3。如果用阴离子拄，缓冲液最佳PH值多少合适？我初步定在8.0，但害怕PH值过高影响酶活性！
请指教！！

如果用大孔吸附树脂,在富集样品的同时也可去除大部分色素,但还会有部分色素残留.
不知道你的样品经不经起有机溶剂,可以的话source 30去色素效果可以,上完样后,低浓度异丙醇即可去除色素.

再有可以先过个别的柱子,拿出点填料做个小柱专门用来去除色素,你的蛋白PI=5.3可以在pH>6时,过个阳离子柱,样品不吸附而穿透,色素被吸附,或用类似的方法来选择性吸附色素,填料再处理后可以继续用.

我觉得pH8.0层析应该可以,试试才知道,温度要低,发酵液要尽快低温处理,不然里面溶液系统复杂,蛋白很容易降解的,即使是分泌表达.

拿出点填料做个小柱专门用来去除色素？我们实验室可不敢这么做！多谢帮助！
过个阳离子柱,样品不吸附而穿透,色素被吸附,或用类似的方法来选择性吸附色素。这个方法还行。有时间试一试。可现在关键的是表达产物一下子没活性了！这表达也不稳定。郁闷！