|
楼主 |
发表于 2008-12-27 11:52:28
|
显示全部楼层
工业微生物育种 - 江鸟行云(279032900)
诱变处理及耐受性突变菌株的液体筛选方
法:将酵母菌制备成菌悬液 ,取 5 mL 菌悬液于直径
9 cm的培养皿中(内放两个大头针)用磁力搅拌器均匀搅拌 ,并垂直置于紫外灯(15 W 紫外灯 ,距离
30 cm)下.紫外照射一定时间后 ,在红光灯下把照射过的菌液全部倒入预先准备的 50 mL 液体培养基中 ,在黑暗中放置 2 h 后加入 4. 5 g/ L 的 22苯乙醇 ,
用黑纸包好于28 ℃,200 r/ min 的摇床振荡培养6 d后 ,测各个摇瓶中菌液的 OD600 .从OD600明显增大的摇瓶中取200μL 菌液涂布于 3. 0 g/ L 22苯乙醇的固体培养基,于28 ℃ 培养4 d后挑取耐受性突变株.
(1) 22苯乙醇的转化合成:将 22苯乙醇耐受性
突变菌株接入液体培养基 ,于28 ℃,200 r/ min 培养12 h.然后按照 1 ×107个细胞/ mL 的接种量接入发酵培养基 ,加入 5 g/ L 苯丙氨酸 ,于 30 ℃,200 r/min 的摇床振荡培养 36 h.
(2) 22苯乙醇含量的测定:取 1 mL 发酵液经过
10 000 r/ min 离心 10 min 后 ,吸取上清液进行液相
分析.用 HPLC对发酵液中的 22苯乙醇进行测定的
条件为:Agilent 1 100 高效液相色谱仪;Agilent C218 柱(4. 6 mm × 250 mm) ;柱温25 ℃;梯度洗脱:前15 min 内由超纯水 n 乙腈 (95 n 5) 均匀过度到100 %的乙腈;保持 100 %乙腈洗脱 5 min. 流速 1mL/ min ,进样量 20μL ,检测波长 254 nm. 22苯乙醇保留时间 10. 75 min
生物技术-发酵方向 - 星/sun晴(275478975)
但是怎么知道挑哪个菌株呢?怎么知道这个菌就产量高了呢?
[ 本帖最后由 lwangd8 于 2008-12-27 11:56 编辑 ] |
|