《生物技术药物学》（吴梧桐主编）复习题和答案

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1.我国自行研制的批准上市的生物技术药物
  IFN-α1b、IFN-α2a、IFN-γ，IL-2, IL-2125ser，G-CSF，GM-CSF，SK, EPO, EGF, b-EGF, Insulin， GH, TPO, TNF衍生物， 乙肝疫苗， 痢疾疫苗

2.进行合理药物设计最常见的药物作用靶物质
酶  离子通道   受体  核酸
3.二期临床试验进行有效性和安全性所需要的病例数是多少，三期的病例数是多少？
第二阶段所需病例数不少于300例，主要病种不少于100例，而且临床试验研究的单位不少于3个
   方法：一般可以不采用双盲法。对那些可能在临床长期使用的药物应当有积累用药0.5～1年的病例50～100例。
（三）III期：这个阶段需要在组两的病人身上进行，通常为1000～3000例
4.发明的创造性
创造性：
1）、首创性的发明创造:提出一个全新的技术方案
2）、取得预料不到的技术效果的组合和选择发明
3）、要素关系改变的发明
4）、解决长期存在的技术难题的发明
5）、转换发明：把一个已知技术领域用于另一领域
5.在研的生物技术药物，大部分表达在什么细胞？
目前，美国418种在研药物中70％是由以中国仓鼠卵巢细胞（CHO）为主的哺乳动物细胞表达的。
6.生物技术药物制造过程主要控制
(一)细胞库的建立与鉴定
1）.含表达载体的宿主细胞应经过克隆而建立主细胞库,在原始种子阶段应确认克隆基因的DNA序列。
2.） 详细记录种子的来源、方式、保存、预计使用寿命。不应含有致癌和感染性外源因子。应进行细胞的鉴别标志，如特异性的免疫学或遗传学的标志。
3）． 提供宿主细胞的资料：细胞株名称、来源、传代情况、鉴定结果及基本生物学特征。
(二)制造过程的控制
1）． 有限代次生产控制
提供产量恒定性方面的数据，确定在生产过程中允许的最高细胞倍增数或传代次数。
2）． 连续培养生产控制
提供经长期培养后所表达基因的分子完整性资料，宿主细胞的表型和基因型特征。
3）． 纯化工艺过程的质量控制
尽量去除污染病毒、核酸、宿主细胞、杂蛋白、糖、其他杂质以及在纯化过程中带入的有害物质。
（三）最终产品的质量控制
有关产品的鉴别、纯度、稳定性和活性等方面。
7.影响生物技术药物化学稳定性的因素
1）水解作用：蛋白水解酶使蛋白质的肽键断裂。
2.） 脱酰氨作用：天冬酰氨（Asn），谷氨酰氨（Gln）
3.）二硫键交换: 还原剂使二硫键断裂，蛋白质失去活性
4.）消旋作用：在一个以上的不对称成中心发生的构型改变。
5.） 氧化反应
  影响因素：强氧化剂以及空气中的氧
含Met，Cys残基的侧链容易发生氧化反应，含有芳香族氨基酸残基Trp（色），Tyr（酪）的蛋白质类药物在纯化和储存过程中容易发生氧化反应。
8. 淋巴毒素α又叫  肿瘤坏死因子-β（TNF-β）
9.细胞因子概念：
由免疫细胞和某些非免疫细胞（如血管内皮细胞、表皮细胞和成纤维细胞等）经刺激而合成分泌的一类小分子量可溶性糖蛋白。
细胞因子包括(按功能):
①白细胞介素（IL） ②干扰素（IFN） ③肿瘤坏死因子超家族（TNF）④集落刺激因子（CSF） ⑤趋化因子（chemokine） ⑥生长因子（GF）
细胞因子的特性：
①细胞因子的产生和作用具有多向性  ②正常的静息或休止状态的细胞必须经过激活后才能合成和分泌细胞因子  ③自我调控的过程  ④低分子量的分泌型蛋白质，常糖基化　⑤需与靶细胞上的高亲和力受体特异结合后才发挥生物学效应  ⑥生物学效应极强  ⑦多种细胞因子也常具有某些相同或相似的生物学活性  ⑧主要参与免疫反应和炎症反应  ⑨以非特异性方式发挥生物学作用且不受MHC限制  ⑩某种细胞因子对靶细胞作用的强弱取决于细胞因子的局部浓度，靶细胞本身的类型（即作用于自身产生细胞）和旁分泌方式以及同时存在的其它细胞因子种类有关  ⑾旁分泌或自分泌形式作用  ⑿网络性
细胞因子的生物学活性：
①抗细菌作用  ②抗病毒作用  ③调节特异性的免疫反应  ④刺激造血  ⑤促进血管的生成
细胞因子受体的作用特点：
细胞因子受体信号主要由JAK/STAT途径传递，还可引起细胞内发生不同蛋白质的磷酸化、肌醇磷酸代谢变化、钙离子变化等。一些受体本身就有激酶活性;另一些受体没有蛋白激酶活性，但结合配体以后能活化其它有激酶活性的膜蛋白或胞浆内激酶，间接发挥作用。
10.不能分泌细胞因子的细胞有哪些？
除免疫细胞和某些非免疫细胞（如血管内皮细胞、表皮细胞和成纤维细胞等）外
12. 合成分泌淋巴毒素的细胞是  活化的淋巴母细胞
13.可以以自分泌形式刺激T细胞本身的细胞？IL-2

14.细胞因子的生物学效应复杂性表现在哪些方面？






15.IL-2由哪些细胞产生？  主要由活化的Th细胞产生

16.细胞受体有什么特点？
细胞因子受体作用特点
     细胞因子受体信号主要由JAK/STAT途径传递，还可引起细胞内发生不同蛋白质的磷酸化、肌醇磷酸代谢变化、钙离子变化等。
    一些受体本身就有激酶活性，例如M-CSF、SCF、EPO、PDGF、FGF、EGF、IGF-1、HGF等的受体。另一些受体没有蛋白激酶活性，但结合配体以后能活化其它有激酶活性的膜蛋白或胞浆内激酶，间接发挥作用。
17.既有造血又有白介素的功能的细胞因子有？
   IL-2 ，3， 4 ，5， 6， 7， 9 ，13
18.刺激红细胞产生的细胞因子有？/刺激红细胞产生的细胞因子是
促红细胞生成素（EPO）
  转化生长因子-a（TGF-a）
  IL-2，3，4，5，6，7，9，13
粒细胞集落刺激因子（G-CSF）
粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）
19.具有提高运动耐力作用的细胞因子？促红细胞生成素（EPO）

20.刺激造血干细胞分化成熟的是什么？
集落刺激因子(CSF)
干细胞因子（SCF，又称c-Kit配体）

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21.那些细胞因子从尿样中提取？
促红细胞生成素(EPO)
表皮生长因子（EGF）
22.生长激素可引起那些生物学效应？
(一) 促进生长：与骨的生长有关，能促进长骨的软骨细胞增生，加速软骨和骨的生长，使人体长高。
（二） 对代谢的作用
1） 对蛋白质代谢：促进氨基酸转运入细胞，加强DNA、RNA的合成，使尿氮减少，呈正氮平衡。间接的刺激肝脏合成IGF，通过IGF的促细胞分裂、增殖来发挥作用。
2） 对糖代谢的作用：短期效应：会产生胰岛素样效应，引起低血糖，并伴有对胰岛素释放的抑制。长期效应：升高血糖。
3）对脂肪代谢：激活对激素敏感的脂肪酶，促进脂肪分解，增强脂肪酸的氧化，提供能量。
23.卵泡刺激素有哪些作用？
卵泡刺激素（FSH）：促进卵泡颗粒层细胞增生分化，促进整个卵巢长大。作用于睾丸曲细精管可促进精子形成。注射FSH只增加卵泡数目，对卵泡成熟并无作用。
24.类似胰岛素的功能的生长因子是？
胰岛素样生长因子（IGF）  IGF-I治疗A型和B型胰岛素受体功能紊乱（胰岛素糖尿病）。
25.对凝血活性最强的天然抑制剂
   水蛭素
26.玻璃酸酶作用于玻璃酸分子的什么结构？
玻璃酸酶作用于玻璃酸分子的葡萄糖胺键，使之水解和解聚，降低细胞间质的黏度，使细胞间液易流动扩散，故可使局部积贮的药液、渗出液或血液扩散，加速吸收，减轻局部组织张力和疼痛，并有利于水肿、炎性渗出物的吸收、消散。
27.治疗用酶有哪些特点？
（一）具有一般酶的特点
（1）催化效率极高，为普通的无机催化剂的106～1013；
（2）选择性高：即专一性强，对底物具有严格的选择性，一种酶只作用于结构近似的一类分子，甚至只催化一种化合物；
（3）酶对环境条件极为敏感；
（4）酶活性可以调控。
（二）治疗用酶的特殊特点
（1）在生理条件下具有较高的活力和稳定性；
（2）在体内有较长的半衰期；
（3）在生理条件下的酶促反应是不可逆的；
（4）对酶制剂的要求高：纯度高，不含其他
   毒性杂质；
（5）异体蛋白的治疗用酶具有抗原性，会产
   生抗体，引起抗原抗体反应。
28.唯一被批准合法使用的人用疫苗佐剂是？
以氢氧化铝和磷酸铝为代表的铝佐剂是唯一被批准合法使用的人用疫苗佐剂
29.人鼠的嵌合抗体组成？
将鼠单抗的V区＋人抗体的C区 ，含65％的人蛋白
30.什么叫基因封条?
俗称“反义RNA（antisense RNA）”—能与靶分子mRNA序列互补的RNA片段，通过碱基对氢键的作用与靶mRNA形成双链复合物，影响基因的转录、翻译和加工过程，从而调控基因的表达。
31. 肿瘤基因治疗的策略是什么？
①导入抑癌基因恢复其活性（p53基因）  ②封闭癌基因的过表达（反义RNA 、RNA干涉）③肿瘤的免疫调节基因治疗  ④导入耐药基因治疗  ⑤自杀基因治疗
32. 基因治疗的非病毒载体给药系统有哪些？
①裸体DNA直接注射  ②电穿孔技术  ③微粒子轰击法  ④显微注射  ⑤脂质体或脂质复合物  ⑥聚合物  ⑦基于抗体的靶向基因传递系统 etc.

32.干扰素β是什么细胞产生的？
成纤维细胞，上皮细胞
33.参与内源性凝血途径的凝血因子有哪些？
   Ⅷ(抗血友病甲因子)  Ⅸ（抗血友病乙因子）  XI（抗血友病丙因子）  XII （Hage men因子） PK（前激肽xixi释放酶）  HK（高分子量激肽原）
34.哪些结构决定了SOD性质？
SOD（超氧化物酶）是需氧生物体内普遍存在的一种酶；是一种肽链大分子金属酶，含有两个亚基。其性质不仅取决于蛋白部分，还取决于活性中心金属离子的存在。按其金属离子种类不同，SOD有Cu•Zn-SOD、Mn-SOD、和Fe-SOD。
35.肿瘤抗原有哪些？
细胞癌变过程中出现的新抗原及过度表达的抗原物质的总称。
黑色素瘤抗原—MAGE，肥大细胞瘤抗原—P815A
甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP) ：由胎肝和卵黄囊产生的70 kD分子量的糖蛋白
癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA) ：一种膜结合性胚胎抗原，分子量为180 kD的糖蛋白
36.天冬酰胺酶作为抗肿瘤药物的机制
能快速消耗血循环中的天冬酰胺、谷氨酰胺及谷氨酸的浓度，从而消耗肿瘤细胞合成蛋白质所必需的底物，快速抑制蛋白质合成，而不影响正常细胞，此即天冬酰胺的选择性细胞毒作用。
37.单克隆抗体治疗肿瘤的作用机制
作用机制：抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用或补体依赖性细胞融解作用
起作用方式：与药物、毒素或房放射性药物偶联，成为一种“生物导弹”，用于靶向治疗。
单克隆抗体除了可作为靶向治疗药物外，还可以作为抗肿瘤药物的靶向给药系统（或偶合于给药载体，或与药物形成复合物），将抗肿瘤药物传送到肿瘤细胞，再通过内合等方式进入肿瘤细胞，能使药物大大增强疗效，减轻细胞毒性。
38.抑肽酶的临床应用有哪些？
①防治急性胰腺炎
②在体外循环中的应用： 全身性炎症反应的防治
                       保护血小板
                       保护心肌
                       减轻内皮细胞损伤
③在原位肝移植术中应用  ④在腹腔手术后直接注入腹腔，能预防肠粘连  ⑤止血作用   ⑥用于休克  ⑦其他：支气管炎、类风湿性关节炎等
39.肝素有什么生物学活性？
与AT-III（抗凝血酶III）结合，催化灭活凝血因子IIa、Xa、Ⅸa和 XIIa。
40.猪和人的胰岛素有什么区别？
猪胰岛素和人胰岛素只差一个氨基酸，即猪胰岛素B30为丙氨酸，而人胰岛素为苏氨酸。
41.基因治疗治疗SCID患者采用的方法
①基因置换（gene replacement）
将致病基因整个地被有功能的正常基因所置换，使致病基因永久地得到更正。
②基因修正(gene correction)
将致病基因的突变碱基序列得以纠正，而正常序列部分予以保留，使突变的致病基因恢复正常功能。即使致病基因的突变序列纠正为正常序列（用碱基点突变技术）。
③基因修饰(gene augmentation)
将目的基因导入缺陷细胞或其它细胞，目的基因的表达产物可修饰和改变缺陷细胞的功能或使原有的功能得到加强，但致病基因本身并未得到改变。
④基因失活(gene inactivation)
就是应用反义技术(antisense technology)特异封闭某些基因的表达，以达到抑制或阻止某些有害基因的表达，即人们通常所说的反义疗法。
⑤基因抑制(gene inhibition)
就是导入外源基因去干扰、抑制有害基因的表达，如向肿瘤细胞导入抑癌基因等。
其他：增强机体免疫能力的免疫基因治疗，耐药基因治疗等
42.开环胰岛素泵与闭环胰岛素泵的组件区别是什么?
开环胰岛素泵：胰岛素输入泵
闭环胰岛素泵：血糖监测仪，小型电子计算机，胰岛素输入泵
43.逆转录病毒载体有什么优点？
①高效感染宿主细胞，转染率可达100%；
②可将外源基因整合到宿主染色体，外源基因在宿主细胞稳定表达，并随细胞分裂而传代；
③宿主范围广，可同时感染大量细胞并长期存留。

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44.尿激酶的生物学功能
一种有效的溶血栓药
1.急性心肌梗死，脑梗死，心绞痛和肺栓塞，用药越早，溶栓效果越好。
2.眼外伤性玻璃体出血，通过融解血块和促使其吸收，能避免有机化条索形成。
45.水蛭素的结构
①由65~66氨基酸组成的低分子多肽   
②N末端 :Cys6－Cys14 ,Cys16－Cys28 ,Cys22－Cys39
③C末端富含酸性氨基酸残基,是与凝血酶结合所必需的
④63 位硫酸化的酪氨酸残基
⑤肽链中部（46－48位）还有一个由Pro－Lys－Pro 组成的特殊序列,不被一般蛋白酶降解
46.什么叫合理药物设计？
以某一疾病发生的分子机制为基础，进一步确定药物作用的靶物质，并阐明靶分子的结构与功能，再以靶分子为对象设计药物分子，使其能专一结合于靶分子的活性部位（如酶的活性中心），发挥对靶物质激活或抑制的作用。
47.什么叫反义技术？
反义技术（antisense technology）——是指人工合成或生物合成的DNA或RNA, 它们能与RNA互补，封闭基因的表达，从而抑制引起疾病发生的基因的表达，达到治疗疾病的目的。
48.细胞因子的概念?
由免疫细胞和某些非免疫细胞（如血管内皮细胞、表皮细胞和成纤维细胞等）经刺激而合成分泌的一类小分子量可溶性糖蛋白。
49.什么叫血液制品?
由健康人的血浆或特异免疫人血浆分离,提纯或由重组DNA技术制成的血浆蛋白组分或血细胞组分制品,如人血白蛋白、人免疫球蛋白、人凝血因子(天然或重组的) 、红细胞浓缩物等,用于诊断、治疗或被动免疫预防。
50.什么叫基因治疗？
将正常功能性基因置换或弥补缺陷缺陷基因的手段，广义地讲，即将新的遗传物质转移进某个体的细胞内从而获得治疗效果，导入的基因可以是与缺陷基因相对应的功能性同源基因，也可以是与缺陷基因无关的治疗基因。
51.生物技术药物生产的一般过程
获得目的的基因→构建重组质粒→构建基因工程菌（或工程细胞）→大规模培养工程菌→产物分离纯化→除菌过滤→半成品检定→制剂→成品检定→包装
52..基因治疗的基本方法有哪些？
①基因置换（gene replacement） ②基因修正(gene correction)  
③基因修饰(gene augmentation)④基因失活(gene inactivation)  ⑤基因抑制(gene inhibition)
53.白介素的主要生物学功能有哪些？
①参与免疫应答与免疫调节
  ②刺激造血细胞发育，分化 和参与损伤组织的修复
  ③参与神经、内分泌系统和细胞因子共同构成细胞间信号传递的分子系统
  ④参与细胞凋亡和抗肿瘤作用  
⑤参与炎症和免疫病理性的组织损害
54.单克隆抗体是如何制备的，其治疗作用有哪些？
制备：
①抗原制备；②免疫动物；③免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备；④细胞融合；⑤杂交瘤细胞的选择培养；⑥杂交瘤细胞的筛选；⑦杂交瘤细胞的克隆化；⑧单克隆抗体的检定；⑨分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立；⑩单克隆抗体的大量制备。
治疗作用：
1. 抗肿瘤作用
①作用机制：抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用或补体依赖性细胞融解作用②起作用方式：与药物、毒素或房放射性药物偶联，成为一种“生物导弹”，用于靶向治疗
2. 在移植中的作用
①在自体骨髓移植中的作用
免疫毒素可以根据组成的抗体性质特异性的清除瘤细胞。
②在异体骨髓移植中的作用
采用造血干细胞特异性抗体CD34分离造血干细胞。
③在实体器官移植中的应用
在移植手术后，早期通过抗体诱导治疗，可防止那些有急性排斥反应高发危险的患者发生急性排斥反应。主要是阻断异体抗原的识别而产生免疫抑制效应。
3.抗感染作用
4.抗血栓形成
封闭血小板糖蛋白IIb/IIIa整合素受体。
5.在药物中毒和毒素方面的应用
应用该药物或者毒素的特异性抗体或片段，他们形成复合物，改变了药物或毒素的药物动力学，从而起到解毒作用。
6.构建独特型疫苗
用单抗去免疫动物，或者是再通过细胞融合技术制备具有抗原内在影像的抗独特型抗体，能激发细胞免疫和体液免疫。 抗乙肝、脊髓灰质炎、狂犬病等的抗病毒疫苗。
7.自身免疫性疾病及变态反应性疾病
变态反应：溃疡性结肠炎，哮喘，银屑病、风湿等
55.天冬酰胺酶的作用及作用机制是什么？
天冬酰胺是细胞合成蛋白质所必需的氨基酸。正常细胞有天冬酰胺合成酶，自身能够合成天冬酰胺，而某些肿瘤细胞本身缺少天冬酰胺合成酶。
抗肿瘤的机制：能快速消耗血循环中的天冬酰胺、谷氨酰胺及甘氨酸的浓度（这三种氨基酸是合成嘌呤和嘧啶环的重要组成部分），从而消耗肿瘤细胞合成蛋白质所必需的底物，快速抑制蛋白质合成，而不影响正常细胞，此即天冬酰胺酶的选择性细胞毒作用。
56.什么叫LD50？
半数致死量（LD50）表示在规定时间内，通过指定感染途径使一定体重或年龄的实验对象半数死亡所需最小细菌数或毒素量。
57.什么叫治疗指数？
治疗指数是半数致死量与半数有效量的比值，是衡量药物安全性大小的指标。
58.怎样判断药物的安全性？
治疗指数（TI）是衡量药物安全性大小的指标，治疗指数=半数致死量（LD50）/半数有效量，治疗指数表示半数致死量与半数有效之间的剂量距离，TI值越大表示药物安全性越大。
但治疗指数未考虑药物在最大有效量时毒性的大小，因而安全指数及安全界限评价药物的安全性比治疗指数更合理。
安全指数=最小中毒量（LD5）/最大治疗量（ED95）
安全界限=[（LD1-ED99）/ED99]*100%
59.什么叫两相胰岛素？
胰岛素混合制剂，具快速和延效作用。
60.什么叫血液代用品？
能运输和释放氧到组织中并具有扩容作用的非细胞溶液。
61.什么叫DNA疫苗，怎样发挥作用？
DNA疫苗又称基因疫苗或核酸疫苗，是一种细菌的质粒，在克隆了特异性的基因以后，能在真核细胞中表达蛋白质抗原，刺激机体产生特异的体液和细胞免疫反应，尤其是能诱导产生具细胞毒杀伤性功能的T淋巴细胞，可有效地预防病毒、细胞内寄生的细菌和寄生虫所引起的传染病。
作用机制：
一部分蛋白质在降解后与MHCⅠ类分子结合，并被提呈到细胞的表面被CD8+T细胞的受体识别，而激活细胞毒T细胞的活性，杀伤靶细胞；另一部分蛋白质也可以分泌出去，再像外源蛋白一样被抗原提呈细胞摄取，在吞噬溶酶体内降解成多肽，进一步与MHCⅡ类分子结合，并由抗原提呈细胞提呈到细胞表面被Th2细胞的受体识别，然后由Th2细胞分泌的细胞因子作用于B细胞，而刺激以产生抗体为主的体液免疫反应。
62.新药研究开发的过程（分哪几个阶段）？
1.制定研究计划和制备新化合物阶段
2.筛选: 体外：针对药物靶标在分子水平、细胞水平和组织器官水平进行筛选
           体内：动物模型进行筛选
3. 临床前研究
①药效学：药物的疗效确切，明确适应症，药物所需要的剂量
②一般药理学：了解新药主要药效作用以外的广泛药理作用。
③毒理学：需要进行全身用药、局部用药和特殊毒理学研究
④药物依赖性试验
⑤药代动力学
4.临床试验研究：评价新药的关键阶段，评价新药的安全性和有效性，分4期
5.申报新药证书和生产批件
6.试生产：1～2年
7.后市场：疗效和毒副作用的情况
63.IL-2在免疫调节和抗肿瘤中的主要生物学功能是什么？
（1）抗肿瘤：
      IL-2在体外可诱导PBMC或肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）成为淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK）。LAK/IL-2对肾细胞癌、黑素瘤、非何杰金氏淋巴瘤、结肠直肠癌有较明显疗效，对肝癌、卵巢癌、头颈部鳞癌、膀胱癌、肺癌等有不同程度的疗效。
（2）治疗感染性疾病：
    动物实验结果表明，IL-2对某些因细胞免疫功能低下而受病毒感染，需增强细胞免疫功能的病人有一定疗效。IL-2本身无直接抗病毒活性，它是通过增强CTL、NK活性以及诱导IFN-γ产生而介导抗病毒感染的。
64.以单纯疱疹病毒为例，说明自杀基因的作用机制？
TK/GCV 单纯疱疹病毒（herps simplex virus, HSV）Ⅰ型胸苷激酶（thymidine kinase, tk）基因编码胸苷激酶，特异性地将无毒的核苷类似物丙氧鸟苷（ganciclovir, GCV）转变成毒性GCV三磷酸核苷，后者能抑制DNA聚合酶活性，导致细胞死亡。
65.干扰素可以分为哪几类？其生化性质及作用原理是什么?
  分类：Ⅰ型IFN: IFN-α、IFN-β
          Ⅱ型IFN: IFN-γ
所有的干扰素都是通过与细胞表里受体结合，启动信号传导，通过级联反应改变某些干扰素敏感基因的表达，从而发挥各自生物学效应；所有干扰素激活基因都存在特征性干扰素激活效应因子（ISRE）。当特异性调节因子与（ISRE）结合，信号传递达到顶峰，激活RNA聚合酶II，催化干扰素敏感性基因转录。基因表达产物进一步调节细胞的抗病毒免疫应答和其他生物学效应

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66.重组人胰岛素的合成途径是怎样的？
方法一：把编码胰岛素A链和B链的核苷序列分别克隆到两个不同的大肠杆菌细胞中，然后这些细胞在大规模发酵罐中分别培养，纯化后的A链和B链在适宜的氧化条件下共同保温，以促进链间二硫键的形成，最终生成人源化胰岛素
方法二：把编码人胰岛素原的核苷序列克隆到大肠杆菌中，随后纯化处理表达出的胰岛素原，并用蛋白水解酶切除胰岛素原的C肽。

67.胰岛素对血糖调节机制
加速全身组织（脑除外）对葡萄糖的摄取和利用，减少血糖的来源，使血糖降低。
（1）加速心肌、骨骼肌和脂肪细胞膜上载体（葡萄糖转运蛋白4，Glut-4）对葡萄糖的转运，促进葡萄糖通过细胞膜，增加外周组织对糖的摄取。
（2）促进肝脏等器官对葡萄糖的氧化和酵解
（3）促进肝、肌肉等器官的糖原合成
（4）促进葡萄糖转化成脂肪和氨基酸。
（5）抑制糖异生：
      胰岛素能拮抗胰高血糖素，肾上腺素及糖皮质激素的糖异生作用。胰岛素对糖异生过程中的关键酶，如葡萄糖6-磷酸酶、果糖1，6-二磷酸酶、磷酸烯醇式丙酮酸羟激酶和丙酸羟化酶有阻抑作用，使葡萄糖的异生减少。
总之，胰岛素使血糖的葡萄糖来源减少，而去路增加，因此，当胰岛素不足时，可引起血糖增加，当高于肾阈值（160mg%）时，就会发生尿糖

68.造血细胞生长因子有哪些？其生物学功能有哪些？

白细胞介素系统IL-1~IL-18
干扰素家族（IFNs）：α、β，γ 3类
集落刺激因子(CSF)
粒细胞集落刺激因子(G-CSF)
粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)
巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)
多潜能细胞集落刺激因子（又称白介素-3）
促红细胞生成素(EPO)
促 血小板生成素(TPO) ：刺激骨髓巨核细胞分，化成熟为血小板。
肿瘤坏死因子（TNF）
转化生长因子-β（TGF-β）

69.常见的溶血栓的药物有哪些？其作用机制是什么？
尿激酶，葡激酶，组织纤溶酶原激活剂（tPA），链激酶
水蛭素，肝素，维生素k抗代谢物

作用机制：