细胞的碘化丙锭（PI）染色

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1、细胞的碘化丙锭（PI）染色
PI和溴化乙锭（EB）为同类物质，与EB一样，PI嵌入DNA双螺旋中，可使荧光强度增加约20倍，PI染色的荧光强度约为EB染色的1.8倍，以488nm波长激发，DNA-PI复合物最大的发射波长约为615nm。
（1）小鼠Lewis非癌细胞（3LL）DNA含量测定方法
①从C57BL/6小鼠上切除肿块，在培养皿内用PBS冲洗。
②去除结缔组织及脂肪，剪碎肿块。
③小碎片移入1.20 x 38mm注射针，加压使其通过，于4℃条件下重悬细胞于HBSS中。
④向200-300ul细胞悬浮（5 x 10^5个/ml）中加入3ml PI（50ug/ml）染色3LL细胞，于4℃存放20-30min。
⑤测定580-750nm之间的发射荧光，以去除未结和PI产生的激发光与发射光谱线之间的重叠部分。
PI染液：0.1%柠檬酸钠1000ml+PI 5mg+1%蒸馏水
（2）培养细胞DNA的流式细胞仪分析
①从培养皿中吸去培养基，以HBSS冲洗2次。
②加入PI 5ml于培养皿中，在4℃放10min。
③用吸管反复吹打细胞，使细胞破坏，胞核释放出来，再行流式细胞仪分析。
（3）完整细胞DNA的PI染色
①70%乙醇固定的细胞悬液，离心，去固定液。
②室温条件下加入PI染色一批细胞（105-106个/ml），时间为30min，然后行流式细胞仪分析。
(4)光辉霉素和PI的DNA 染色 在荧光抗生素光辉霉素和PI联合染色过程中，光辉霉素的供体分子被PI的受体分子接受产生能量转移，该染色技术主要用于实体肿瘤组织，精子细胞及妇科标本，同时也适用于体外培养的细胞。
①分离制备的细胞悬液即可使用，若用70%乙醇固定可保存1周，
②以PI/光辉霉素染色，4℃1h（PI为10mg/L、光辉霉素为10mg/L）。
③染色后进样，以100W汞灯作为激光光源，使用BG123nm阻断滤片，叠加K590型高通滤器。