培养基的问题一则

gl19860312

涵宝贝(44461677) 2012/9/5 16:39:04
NH4Cl 0.1g   MgCl2 0.02 g   酵母膏 0.01g   K2HPO4 0.05 g   NaCl 0.2 g   琼脂 2g   蒸馏水 90 ml   100 Pa灭菌 20 min。   灭菌后，无菌操作加入经过滤除菌的 0.5 g／5 ml NaHCO3，再无菌加入过滤除菌的 0.1g或0.1mlNa2S·9H2O（降低培养基的氧化还原值），最后再加5ml经过滤除菌的乙醇、戊醇或4％丙氨酸。用过滤灭菌的 0.1mol／L H3PO4 调pH至7.0。
灭完菌后颜色变得很深

a130330312<tee5277@sina.com> 2012/9/5 16:39:55
你灭菌温度高 在碱性条件下 容易碳化

涵宝贝(44461677) 2012/9/5 16:40:28
灭菌前是很淡的黄色，呈半透明， 完了呈深褐色
那应该在什么条件下灭菌

a130330312<tee5277@sina.com> 2012/9/5 16:41:25
  恩 你可以百度下 梅拉特反应  

涵宝贝(44461677) 2012/9/5 16:41:43
我刚看了一下

a130330312<tee5277@sina.com> 2012/9/5 16:42:49
在高温作用下，溶液中氨基化合物（氨基酸、肽、蛋白质等）中的游离氨基与羰基化合物（糖类）中的羰基相互反应而产生深褐色产物的复杂反应。
其实 书上说是在碱性条件下发生的





涵宝贝(44461677) 2012/9/5 16:44:48
可是我的培养基配完后是酸性的
5.5
ph
不到6

涵宝贝(44461677) 2012/9/5 16:46:21
那这是什么原因么
a130330312<tee5277@sina.com> 2012/9/5 16:46:55

应该是 梅拉特反应吧 你控制下温度，在碱性条件下 貌似还有液糖的存在
会碳化

涵宝贝(44461677) 2012/9/5 16:55:15
那跟灭菌时间是不是也有关系
我们一般都是灭30分钟
我们是第一次做这种培养基
以前是做lb的

a130330312<tee5277@sina.com> 2012/9/5 16:56:38
我认为是有关系。
你们 灭菌温度多少

涵宝贝(44461677) 2012/9/5 16:56:59
121度
是不是有点高

a130330312<tee5277@sina.com> 2012/9/5 16:57:27
从121°开始计时吗





涵宝贝(44461677) 2012/9/5 16:57:34
是的
然后灭30分钟

a130330312<tee5277@sina.com> 2012/9/5 16:58:15
我们稳定在118 开始计时 半小时

涵宝贝(44461677) 2012/9/5 16:59:07
你们那边 也是做红螺菌科光合分离培养基吗

a130330312<tee5277@sina.com> 2012/9/5 16:59:52
不是 细菌 真菌  我们也有这种情况过

涵宝贝(44461677) 2012/9/5 17:00:17
这种是一种厌氧的菌
不过是兼性厌氧的

a130330312<tee5277@sina.com> 2012/9/5 17:00:36
这跟菌种无关吧 亲

涵宝贝(44461677) 2012/9/5 17:01:26
我知道，我的意思我们是做的这种菌，培养基如果有点偏差影响会大吗

a130330312<tee5277@sina.com>  17:02:22
营养成分是 有破坏的，


涵宝贝(44461677)  17:02:26
哦
我们这种培养基里面含有糖分的只有酵母膏，但是酵母膏用量很少，


涵宝贝(44461677)  17:03:49
灭完后的颜色就好像很浓的红糖水一样
我们在一直找原因


a130330312<tee5277@sina.com>  17:04:36
   这不是很正常？我们 不正常的时候跟酱油一样


涵宝贝(44461677)  17:04:42
而且按照步骤弄完后倒完平板后直接呈半凝固状态
这是什么原因呢


a130330312<tee5277@sina.com>  17:05:31
我们是温度偏高。


涵宝贝(44461677)  17:05:33
按理说加2%的琼脂应该是固体培养基


a130330312<tee5277@sina.com>  17:05:49
可能某些成分被破坏了

gl19860312

论坛管理员(510309215)  17:16:37
NH4Cl和MgCl2 是不是要单独灭？
hailiangch(313699459)  17:17:33
干嘛要单独啊？
论坛管理员(510309215)  17:19:07
NH4Cl灭菌过程中会不会以NH3形势挥发掉一部分 MgCl2灭菌过程中会不会出现部分沉淀
hailiangch(313699459)  17:19:46
你们原来怎么做的呢？
涵宝贝(44461677)  17:20:04
这个培养基的我们是第一次做
论坛管理员(510309215)  17:20:10
没用过这种培养基 看培养基配方感觉一起灭菌不太好  
涵宝贝(44461677)  17:20:27
配方是在网上当下来的
是按照原步骤一步一步来的
hailiangch(313699459)  17:20:51
试一下就知道了
涵宝贝(44461677)  17:23:14
我们原来以为是琼脂的质量不好，就做了一个100ml的，没有灭菌，直接加琼脂煮沸后，再加入灭菌后应该加入的，就能凝固
看来应该是在灭菌的过程中损失了营养成分，才会不凝的
论坛管理员(510309215)  17:24:58
铵根离子本来就不稳定  镁盐一般是不是要单独灭？
hailiangch(313699459)  17:26:11
一起灭没有关系的，放心升温吧
涵宝贝(44461677)  17:26:16
应该不用的单独灭，
需要到121度吗
hailiangch(313699459)  17:27:20
小试嘛？
论坛管理员(510309215)  17:28:03
百度上的 文献上的资料要仔细筛选一下
最好是看最初的配方

涵宝贝(44461677)  17:29:01
最初的配方在哪儿看
论坛管理员(510309215)  17:29:29
去年我们是找的英文文献
涵宝贝(44461677)  17:29:35
是的，是个小试
英文文献
论坛管理员(510309215)  17:30:50
小试的话，可以简单做个正交试验一下——培养基某些成分分开灭菌效果
涵宝贝(44461677)  17:32:16
那这样的话就像你说的铵根离子本来就不稳定  ，那灭菌的温度是多少呢
论坛管理员(510309215)  17:34:25
氯化铵 加热至350℃升华，沸点520℃。
一般的灭菌过程应该就可以
涵宝贝(44461677)  17:35:11
那这样的话我放在一起灭的话应该没什么问题
论坛管理员(510309215)  17:35:34
不过————加热至100℃时开始显著挥发，（不同于碘升华，该变化是化学变化）337.8℃时离解为氨气和氯化氢气体
涵宝贝(44461677)  17:35:38
那些易分解的已经单独过滤灭菌了
比如乙醇
论坛管理员(510309215)  17:35:56
不理解了

boboheao

楼主提到的碱性条件具体是在什么范围，谢谢！

a89440104

这个基本可以判定为 Na2S的原因