请教：工程菌发酵生产酶，酶活不稳定的原因？

70417859

海风(371961907)  9:57:04
请教：工程菌发酵生产酶，酶活不稳定，
有时活力高有时低，SDS PAGE显示均有目的带，
菌种为大肠杆菌，外源基因在质粒上。
用葡萄糖做培养基。
之前一直稳定，现在突然质量反复无常，又查不到原因。
染菌状况有查过，可排除。
怀疑原因是形成的蛋白质没有得到正确的修饰，或是其它原因？
怎么解决？

lwdfjw

发酵同盟福建群 - 海波神韵(409600894)
原核生物表达酶体系，蛋白没有加工修饰系统，容易错误折叠的

m_i_l_u

实验证明是单位酶活偏低
还是由总量偏低造成的酶活偏低
每次发酵取一定生物量量的酶液测定酶活

m_i_l_u

实验证明是单位酶活偏低
还是由总量偏低造成的酶活偏低
每次发酵取一定生物量量的酶液测定酶活

nuohenuokang

PH对酶活影响就很大，包括设备的染菌率等等

angelyeast1

问题提供的信息太少了，氮源也是很重要的，氮源的不稳定会影响到菌体的代谢方式，对酶活的影响非常大。

yinqiang1984

发酵同盟福建群 - 海波神韵(409600894)
原核生物表达酶体系，蛋白没有加工修饰系统，容易错误折叠的
lwdfjw 发表于 2010-7-14 12:56

    如果从发酵的角度考虑呢？

yccc1022

从发酵的角度考虑，可能的原因是：
1.发酵原料不稳定，氮源是主要的不定因素，不同批次的产品都会有所不同，要选择大公司的氮源产品，质量稳定性有保证。
2. 碳源选择的是葡萄糖，可否换成其他碳源，比如甘油，糖可能干扰启动，也可产生乙酸，抑制表达。

fuxianhua111

我估计是你们生产的时候葡萄糖流加速度影响的结果

sailor02

首先先分清是酶蛋白分泌量低造成的酶活低，还是蛋白没有正确折叠引起的酶活低，可根据电泳条带深浅情况来判断，另外，根据结果，再对近期发酵的调整情况进行调查，比如人、机、物、环、法、测等方面进行分析，两者结合起来就可以得到很好的结果，然后再做调整。