部分发酵产品配方和工艺

gl19860312

我国1958年才开始赤霉素的研究、生产和推广应用，并于1969年因为党的“九大召开及国庆20周年，故把赤霉素称之为 九二O”．2 5n m’发酵罐工业化生产试验
2．1 试验材料与方法
2．1．1 菌种：G—l14
2．1．2 试验地点：湖南生物制药厂．
2．1．3 培养基
① 种子培养基(w／w)：葡萄糖1．5,糊精1．0,花生粉1．5,MgSO4·7HzO 0．1,KH2PO4 0．1,消泡剂0．2,自来水配制，自然pH值,6m3种子罐中投料3m3 ，实罐消毒121℃ ，30分钟，冷却至28℃待接种。
② 发酵培养基(w／w)：玉米淀粉7．0,饴糖2．5；豆饼粉0．3,花生粉1．0,MgSO4·7H2O 0．07,KH2PO4 0．14；消沫剂0．05， a一淀粉酶0.05，50m3发酵罐投料40m3。pH值自然，实罐消毒121"C，30分钟，冷却至28℃后接入种子培养液．
2，1．4 发酵设备；种子罐6 m3，二档搅拌． 发酵罐体积50m3。，三档搅拌． 流加罐用
另一种子罐代替．
2．1．5 发酵条件
种子罐：培养温度28℃ 士I℃ ，通风量l：I v／v，罐压0．4—0．5 kg／cm2．
发酵罐：培养温度28士l℃ ，通风量l：0．7 v／v，罐压0．1—0．15 kg／cm2．

赤霉素发酵参考环境：10～60吨罐，搅拌转速115转/分，通风量1：1/分， 培养温度大多采用29℃～32℃ 。培养基的起始pH值控制在5.5左右，而将发酵过程的pH值维持在3.5～4.5之间为宜。种子培养基：葡萄糖0.3g，蒸馏水lOOml。豆饼粉 1.5g，淀粉1.Og，葡萄糖1.Og，KH2PO4 0.lg，(NH4)2SO4 0．05g，MgSO4 0.1g，自来水lOOml。
发酵培养基：豆饼粉0.9％．淀粉7.0％，葡萄糖1.0％，KH2PO4 0.15％，MgSO40.08％，
a-淀粉酶0.003％，pH 5～5.5发酵周期130小时
阿维菌素：
种子培养基( g/L)：淀粉30，豆饼粉20，酵母粉2.0，CoCl2·6H20 0.0005,pH 7．0～7．2。
发酵培养基(g／L)：淀粉50，玉米粉l0，酵母粉l0，豆饼粉10．CaCO3 2.0，CoCl2·6HaO
0．0005，pH 7.0～ 7.2。

妥布霉素发酵培养基：黄豆饼粉2.5；葡萄糖1.O； 玉米粉1.O； 玉米淀粉1.5；(NH4)2SO4 0.5；鱼粉O.4；MgS04 0.6； 油1.0；ZnSO4 0.05；CaCO3 0.6;温度37℃,发酵时间112h左右。发酵菌种采用黑暗链霉菌。


洛伐他汀培养基：淀粉，黄豆饼粉，葡萄糖，玉米浆，K2HPO4，(NH4)2S04，CaCO3，发酵菌种采用红曲菌株，M.ruber。发酵周期10天。

甾体激素氢化可的松菌种:蓝色犁头霉(As365)，培养基(%) 葡萄糖1.O，酵母膏0.23，玉米浆1.5，硫酸铵0.5；pH值6.4～6.5；m1)，28℃ 培养24h，投入0.25%的RSA（发酵底物醋酯化合物：17a一羟基孕甾一4一烯一3，2O一二酮一21一醋酸酯，RSA），然后转化36～42h。

综上所述，在利用整肠生菌(Bacillus Licheniformis)等杆菌发酵生产杆菌肽中，由于前期微生物生长繁殖迅速，碳源消耗量较大。在发酵中后期的碳源主要用于杆菌肽次级代谢产物的合成，故碳耗较平稳。所以碳源不宜过多，2％～3％为宜。同时杆菌肽生产与其它抗菌素生长碳源不同，实验表明，加入3％柠檬酸作为碳源最佳，以保证菌体迅速生长。如果中后期碳浓度过高，会引起菌体生长太快，而减少杆菌肽合成。所以，对碳源种类的选择和控制至关重要，在选择适合种类碳源的条件下，碳源量的控制方法可采用碳比消耗速率、菌体比生长速率和控制流加碳源速度。同时，由于过量磷酸盐对杆菌肽前体氨基酸形成有抑制作用，从而干扰杆菌肽的合成。所以，无机磷酸浓度应控制在0．1～1．0 mmol／L，以便既能满足菌体生长需要又不影响杆菌肽的合成。此外用整肠生菌发酵生产杆菌肽，发酵pH为7．5，发酵时间为40 h为宜。
杆菌肽是利用整肠生菌发酵pH为7．5，发酵时间为40 h
杆菌肽发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速100转/分，通风量1：1/分，罐压0.7公斤， pH 7.5左右，培养基主要成分为液化淀粉,豆粕，柠檬酸，各种无机盐适量，发酵菌种采用整肠生菌,发酵周期40小时。

井岗霉素属氨基环醇类抗生素，是一种抗水稻纹枯病的农用抗生素，具有药效高，无毒副作用，持效时间长的特点，是一种重要的农用抗生素。井岗霉素产生菌是在我国井岗山地区土壤中分离出的吸水链霉菌的一个变种，定名为吸水链霉菌井岗变种(Steptomyces Hygroscopicus Var Jinggangensis)，属好氧放线菌。井岗霉素的工业生产过程如下：筛选后的菌种经固体增殖培养后，接入种子罐，在40'C下，通气培养20 h后，移入发酵罐，在40C．通气量0．5～0．8 vvm条件下，发酵40 h放罐，将发酵液过滤后，浓缩至所需浓度，成品包装。
井岗霉素1976年通过鉴定并开始工业生产，但由于种种原因对其发酵过程并未进行系统地研究。同时，发酵工艺也维持在传统的间歇发酵方法，因而井岗霉素发酵的水平(俗称效价)一直徘徊在一万单位(ug/mL)左右，仅为实验室发酵水平的70%。
宁南霉素水稻自叶帖病是水稻生产上的三大病害之一．化学农药虽然有控制该病的作用，但造成环境和农产品污染，直接影响人、畜健康，宁南霉素为首次发现的胞嘧啶核苷肽型新抗生素．它是一种高效，低毒，低残留的广谱性农用抗生索。它对水稻白叶枯病平均相对防治效果为70%左右．高的可达90%，一般增产效果为 l0—20%，高的可达35%．另外它对小麦．蔬菜，花卉等白粉病的防病，增产效果都很显著，对水稻小球菌棱病和油橄榄孔雀斑瘸、疮痂病也有良好的防治效果。
宁南霉：玉米粉2 %淀粉1%．花生饼粉3%，酵母粉0.05%，无机盐按原用量NaCl 0.5%，CaCO3 0.5 %，MgSO4 0.0025%，(NH4)2SO4 0.25%，K2HPO4 0.02%不变。
1．1-l 菌种： 诺尔斯链霉菌西昌变种。
1．1．2 培养基：
孢子斜面培养基(％)：可溶性淀粉2 蔗糖1，硝酸钾1，磷酸氢二钾0．5，硫酸镁0．5，氯化钠0．5，碳酸钙0．5，硫酸亚铁0．01，琼脂2，灭菌前pH7 2～7．4。
种子培养基(％)： 玉米粉2，黄豆饼粉3，酵母粉0．01，磷酸氢二钾0．01，硫酸镁O．0025，氯化钠0．02，碳酸钙0．03，灭菌前pH7．0。
发酵培养基(％)： 玉米粉2，花生饼粉3．5，酵母粉0．05，磷酸氢二钾0．02，硫酸镁0．05，氯化钠0．3，碳酸钙0．5，灭菌前pH7．0。
1．1．3 发酵流程：
续发酵48h达到发酵高峰。

阿维菌素：
多抗霉素参考发酵培养基(％)；玉米粉：1.5，豆饼粉：2.0，饴糖：2.0，KH2P04：O.1，NaCl：0.1，CaC03：O.3，pH6.5。10％接种量，28℃，120h。

BT: 一系列发酵罐间歇发酵结果表明：该茵生长的最适pH在7．0—7．2，弱碱性条件有利于芽泡及晶体的形成；增加培养基中糖含量显著提高茵体的生长量，但对芽泡及晶体的形成均有一定影响；高通气量有利于菌的生长，并可缩短发酵周期，但后期通气量过大影响芽泡及晶体形成。该菌制刑发酵罐间歇发酵的最佳工艺条件为：控制发酵温度在30℃，发酵前期(包括延迟期、加速期、对数期)pH控制在7．0，采用达1：2．0V／(V．min)的大通气量，达1：2．0V／ (V·min)，为菌的生长提供良好的环境，尽可能提高菌数(高于7．5x10的10次方／ml)；发酵后期(减速期、恒定期)不控制PH，并适当减小通气旦到1：0．5,1：1．0V／(V·min)，更有利于茵体向芽孢及伴孢晶体转化(98％以上)。
液体培养基(％)  I号培养基：牛肉膏0．5，蛋白胨1．5，NaCl 0．5，pH 7．2， H号培养基：牛肉膏0．5，蛋白胨1．5，NaCl 0．5，葡萄糖1．0，PH7.2

衣康酸发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速100转/分，通风量1：0.2/分，罐压0.7公斤， pH在4左右，培养基主要成分为葡萄糖14%,米糠0.3%，各种无机盐适量，发酵菌种采用土曲霉,发酵周期90小时。


曲酸发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速100转/分，通风量1：0.2/分，罐压0.7公斤， pH在4左右，培养基主要成分为液化淀粉14%,各种无机盐适量，发酵菌种采用黄曲霉,发酵周期130小时。

实验以豆腐渣、黄浆水为主要原料利用米曲霉发酵生产曲酸，对发酵生成曲酸所需添加的各种营养因素和发酵条件进行了研究。得出该菌利用豆渣的最佳发酵培养基为：豆渣80％、麸皮24％、酵母膏1．2％、MgSO4·7H2O 0．16％，pH为自然；接种量为10％，每250mL三角瓶装量为50g，在30℃发酵培养，5～6d菌体生长量和曲酸产量最大。米曲霉利用黄浆水生产曲酸的最佳发酵培养基为：葡萄糖12％、酵母膏0．5％、MgSO4·7H2O 0．05％、K2HPO4 0．05％、黄浆水100％，pH为6．0，接种量10％。每250mL三角瓶装量100mL在30℃转速为200r／min的摇床振荡发酵培养， 5～6d菌体生长量和曲酸产量最大。对米曲霉沪酿3．042曲酸发酵工艺条件进行了研究，分析了碳源、氮源、pH、装液量对曲酸产酸量的影响，获得了最优摇瓶培养条件：10％蔗糖、1％蛋白胨、pH=2．5、装液量40mL(250mL三角瓶)，发酵温度30℃、摇瓶转速200r/min条件下达最高产酸量3340mg·L^-1。　从土壤中分离出一株曲酸产量较高的米曲霉(Aspergillus oryzan)菌株，对该菌株的发酵条件进行了初步研究。结果表明，该菌株在淀粉8％、酵母膏0．2％、MgSO4·7H2O 0．05％、K2HPO4 0.1％、pH6．0的培养基中，28℃恒温摇床据荡培养6d，摇瓶发酵液曲酸含量为41．2mg/mL。 　
F31012 变株是以Aspergillus oryzae(米曲霉)2336经3次紫外诱变处理，采用快速筛选方法而获得的突变株，研究了F31012变株发酵工艺条件，经过正交试验得出该突变株最佳发酵培养基为：玉米淀粉10％，酵母膏0．2％，K2HPO40.15,MgSO4.7H2O0.05%,KCl0.05%,pH6.0.移种量为 15％，每300ml三角瓶装量75ml，时间6天，发酵培养基最适温度为30℃。

柠檬酸发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速100转/分，通风量1：1/分，罐压0.7公斤，
pH在3左右，培养基主要成分为液化淀粉14%,各种无机盐适量，发酵菌种采用黑曲霉, 发酵
产酸温度为34～36℃，发酵周期90小时。

gl19860312

谷氨酸发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速100转/分，通风量1：1/分，罐压0.7公斤， pH在7左右，培养基主要成分为葡萄糖13%，硫酸镁0.08%，磷酸二氢钾0.08%，糖蜜0.05%，氯化钾0.1%，发酵菌种采用谷氨酸棒杆菌,发酵周期30小时。


赖氨酸发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速100转/分，通风量1：1/分，罐压0.7公斤， pH在7左右，培养基主要成分为葡萄糖14%，硫酸镁0.04%，硫酸铵2%，硫酸氢二钾0.1%，尿素0.4%，豆饼粉0.5%，发酵菌种采用谷氨酸棒杆菌,发酵周期35小时。

种子培养基：葡萄糖1．5 g，(NH4)2SO4 0．4 g，MgSO4·7H2O 40 mg，玉米浆2．0 g，尿素0．1 g，CaCO3 3．0 g，乙酸铵0.1 g，K2HPO4’3H20 0.15 g，盐酸豆饼水解液0.86 mL，水100 mL，pH7．2～7．4，115℃ 高压灭菌15 min。
发酵培养基：葡萄糖15.0 g，(NH4)2SO43.5 g，CaCO3 4.0 g，MgSO4*7H2O 20 mg，玉米浆
2.5 g，乙酸铵0.9 g，生物素20ug，K2HP04·3H2O 0.15 g，盐酸豆饼水解液1.6 mL，水100 mL，
pH7.2～7.4。115℃ 高压灭菌15 min。

赤藓糖醇:在20％ 葡萄糖，O．5％ 酵母膏，pH6．0的发酵培养液中，于34℃发酵摇瓶6天，可产赤藓糖醇32mg/ml。
推荐产品：DF6000K。
在分批培养中，葡萄糖的开始浓度3O0 g／L，赤藓糖醇的容量生产率最高=葡萄糖的浓度控制在225 g／L，容量生产率最高，赤藓糖醇的生。迟缓时间缩短。补料分批培养的葡萄糖开始浓度是300 g／L．控制的葡萄糖浓度是225 g／L，，磷源是肌醇六磷酸(植酸)一在这样的补料分批培养中，400g／L葡萄糖，88小时的赤藓糖醇最后产量为192 g／L,相当于容量生产率2 26 g／L/h，产率48％


醇酮类物质发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速115转/分，罐压0.5公斤，最高通风量1：1/分，pH在6左右，发酵培养基主要成分为液化淀粉，发酵菌种采用芽孢杆菌，发酵时间80小时左右。


碱性蛋白酶发酵菌种为芽孢杆菌(Bacillus)， 37℃，培养48 h，
1发酵培养基l：可溶性淀粉1％、蛋白胨0.5％、Na2HPO4*12H2O 0.4％ 、KH2P04 0.03％ 、CaCl2 0.1％ 、pH中性、121℃灭菌25 rnin。
2发酵培养基Il：玉米粉2％ 、豆饼粉3％ 、麸皮3％ 、Na2HPO4*12H2O 0.4％ 、KH2P04 0.03％ 、ZnCl2 0.1％ 、pH 8.0、121℃灭菌25 min。
发酵培养基(1000mL)：黄豆饼粉50g，玉米粉50g，麸皮25g，KH2PO4 0．3g，Na2HPO4 0．4 g，Na2CO3 lg； 自然pH，在36℃下通风培养，前期通风1：0．15，后期通风1：0．2，搅拌40 h左右。

低温碱性蛋白酶：黄海黄杆菌
发酵培养基
(1) 豆饼粉(水解液，加0．5%NaOH，121℃水解30min，冷却、过滤)4．5%、玉米浆(酶解液．购自华北制药厂)6%、Na2HPO4 0．4%、KH2PO4 0．03%、Na2CO，0．1%、MgSO4 0．02%、CaC12 0，2%、泡敌约0．5‰(视具体情况及时补加)，pH 7，121℃灭菌30 min。
(2)豆饼粉(水解液．加0．5 NaOH，121℃水解30 min，冷却、过滤)4.5%、葡萄糖1%、Na2HPO40.4%、
KH2PO40.03%、Na2CO3 0.1%、MgSO4 0.02%、CaC12  0．2%、泡敌约0.5‰(视具体情况及时补加)，pH7。 121℃灭菌30min
分批发酵动力学试验
使用瑞士Bioengineering公司NLF22型自动控制发酵罐进行分批发酵。发酵罐容积20 L ．两层六平直叶搅拌，双挡板。采用1．2．3节(1)培养基，装料系数0．65，接种量4%，培养温度18℃ ，以5mol／L NaOH液调节pH7左右，通气量1：1、搅拌速度300～500r／min，控制溶氧在35%～45%之间。
补料分批发酵试验
使用瑞士 Bioengineeri g公司NLF22型自动控制发酵罐进行补料分批发酵。发酵罐容积2OL，两层六平直叶搅拌，双挡板。采用1．2．3节(2)培养基，装料系数0．4，接种量4%，培养温度18℃，以5mol／L NaOH液调节pH 7左右，通气量1：1、搅拌速度300～500 r／min，控制溶氧在35 ～45 之间。当细胞进入对数生长期后以60%葡萄糖补料，控制底物浓度并及时取样测定糖浓度、细胞浓度及总酶活力。

弹性蛋白酶发酵培养基酪蛋白胨3%，葡萄糖4%，玉米提取液0.2%，K2HPO4 0.1%，MgSO*7H2O 0.01%，pH7.0．发酵菌种为芽孢杆菌，发酵培养24h．

对黑曲霉黄色变株A一2580产耐温酸性蛋白酶的发酵条件进行优化，由试验结果得如下结论：
(1) 麸皮和豆饼粉分别是该菌发酵产生酸性蛋白酶的良好碳源和氮源．(2)通过正交试验优化培养基，确定其最适产酶培养基为(g／L)：麸皮21.6、豆饼粉 48.4、NH C1 2.0、KH2PO 0.8．(3)培养基起始pH为4～5，接种量30 ml发酵液中2×10  8次方个孢子，发酵温度30℃，时间72 h，酸性蛋白酶的产量达到最高，平均酶活达6700 u/m1．
中性蛋白酶：
菌种耐热芽孢杆菌XJT9503，从新疆吐鲁番火焰山土壤里分离筛选而得．
种子培养基组分(g／dI )：玉米粉2，豆饼粉1，磷酸氢二钠0.4，硫酸镁0.02，氯化钙0.02．
发酵培养基组分(g／dI )：玉米粉2，豆饼粉1，葡萄糖0.5，磷酸氢二钠0.4，碳酸钠0.085，硫酸镁0.02，氯化钙0.02．
3 000 L发酵罐发酵工艺参数为：将培养8 h的种子罐种子，以5％接种量移种于3 000 L发酵罐，46℃ 、180 r／min、4 L／(L·min)通气量下发酵培养18 h左右，测定发酵酶活达10 000 u／mI 以上，还原糖含量低于0．5％，镜检有大量芽孢产生时即可终止发酵，为保证后处理过程中酶活不会大量损失，需迅速降温．

植酸酶发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速115转/分，罐压0.5公斤，最高通风量1：1/分，pH在7左右，发酵培养基主要成分为甘油和氨水，发酵菌种采用毕赤酵母，发酵时间140小时左右。
推荐产品：DF204K。

碱性淀粉酶发酵培养基(%)：酵母膏0．5、玉米淀粉2.0、玉米浆1.5、豆饼粉1.0、NaC1 0.5、K2HPO4 0.1、MgSO4*7H2O 0.02， pHl0，补料培养基(g)：蛋白胨1.0、玉米淀粉1．5、玉米浆1.5、NaC1 0.5，K2HPO40.1、MgSO4*7H20 0.02 、CaCO3 0.5、pH 10。
地衣芽孢杆菌ATCC9789耐高温a淀粉酶的发酵培养基(%), 玉米淀粉，豆粕，磷酸盐，氯化钙等，发酵周期60小时。

普通中温淀粉酶菌种a一淀粉酶枯草芽孢杆菌BF-7658变异株具有较高的产活力，其最适pH为7．5，最适碳氮比为1．4：1。a-淀粉酶发酵培养基：玉米粉7%，豆饼粉5%，磷酸氢二钠O．8%，硫酸铵O．4%，氯化钠O．15%，灭菌前pH7．O一7．5，灭菌后pH6．5—7．0。37.4±1℃下培养44～48小时。

纤维素酶发酵培养基为：(NH4)2HPO4 0.2%、K2HPO4 0．02%，KH2PO4 0．08%、酵母膏1．0 g、MgSO4*
7H2O 0.09%、蛋白胨0.2%、pH 自然，
纤维素酶种子培养基(质量分数，％)：麸皮2，葡萄糖3，(NH4)2SO4 0.15，pH 5.5～6.0，28～30℃，培养40 h；发酵培养基(质量分数，％)：稻草粉6，豆饼粉1，KH2PO40.5，CaC12 0.3，pH 5.5～6.0。28～30℃，培养140 h。发酵菌种采用黑曲霉(Aspergillus niger)GD6。

糖化酶发酵培养基：玉米粉l4%，豆饼粉4%，麸皮1%。发酵菌种采用黑曲霉AS-4309，32℃培养120h,淀粉先用耐热细菌a-淀粉酶液化。
  
黄原胶发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速115转/分，罐压0.5公斤，最高通风量1：0.5/分，pH在7左右，发酵培养基主要成分葡萄糖4%，酵母粉0.05%，豆粕粉0.02%，无机盐适量，发酵菌种采用黄单孢菌，28℃,发酵周期72h，发酵液最高粘度14600mPas左右。

虫草多糖：发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速140转/分，通风量1：0.5/分，罐压0.5公斤。发酵培养基中葡萄糖4.0%，黄豆饼粉4.0%，酵母膏0.5%，KH2PO4 0.25%，MgSO4 O.15%，培养45～72小时。 纤维素合成的发酵配方:

A xylinumNUST4的细菌发酵培养基：葡萄糖24g/L,蔗糖22g/L,蛋白胨16g/L,醋酸2.4mL/L,磷酸氢二钠3.5g/L,磷酸二氢钾1g/L,硫酸镁0.25g/L。Mg2+最适添加量为6g/L;0.015g/LFe2+时纤维素产量达最大;添加0.003g/L烟酸、 0.02g/L生物素和20mL/L乙醇时纤维素产量达9.87g/L

木醋杆菌1.1812发酵产细菌纤维素的适宜培养基和条件是:蔗糖 5%,蛋白胨1.5%,柠檬酸0.2%,Ｎａ2ＨＰＯ4·12Ｈ2Ｏ0.2%,ＫＨ2ＰＯ40.2%,ＭｇＳＯ4·7Ｈ2Ｏ0.03%,乙醇1%,ｐＨ值 6.8,温度28℃,培养周期6ｄ。细菌纤维素产量干重为2ｇ/Ｌ。发酵完毕后过滤收集粗纤维,再用4%ＮａＯＨ溶液冲洗,去离子水和0.5%乙酸反复冲洗,即获细菌纤维素。

木醋杆菌Acetobacter xylinum 1000mL种子培养基中葡萄糖4%(40g)，玉米浆55mL , Na2HPO4 0.5% (5g)，生物素25mg，咖啡因2mg,柠檬酸1 g , pH6.0。将菌龄为24h的液体种子，按8%的接种量，在100r/min摇床中培养Id后静止培养6d，纤维素产量高达7.22g/L，是国内外报道的未进行诱变育种产纤维素的最高值。发酵培养基生物素25mg/L，咖啡因2mg/L,柠檬酸0.1%,其余同种子培养基。

  醋杆菌Ｃ２的最适碳源为Ｄ-甘露糖醇和蔗糖，最适氮源为酵母粉，蛋白胨，无机盐为MgSO4·7H20和柠檬酸三钠；该菌株产酶最佳培养基配方为：蔗糖７％，酵母膏０.７％，蛋白胨１．１％，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ　０.２％，柠檬酸三钠 ０.１％。使用该培养基配方发酵醋杆菌 Ｃ２，纤维素产量可达 ９．５ｇ／Ｌ。

xyg1225

学习，楼主辛苦！

bio-tech

辛苦了，谢谢

qjm

看了一下 感觉不错 楼主辛苦了

冰风颤木

楼主辛苦了

bingpo2012

楼主辛苦了，学习中