蛋白质提取过程中常用的蛋白酶和磷酸酶抑制剂详细使用说明

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在与蛋白相关的检测中，首先最关键的一步便是蛋白质的提取。蛋白质的提取过程中，我们要经常加和蛋白酶抑制剂以防止蛋白质的降解。另外在磷酸化蛋白的研究过程中，磷酸酶抑制剂也是必不可少的，本文总结了常用的蛋白酶抑制剂PMSF，Leupeptin 亮肽素，Aprotinin抑肽酶，Pepstatin胃蛋白酶抑制剂，EDTA-Na2等以及磷酸酶抑制剂NaF氟化钠，Na3VO4 原矾酸钠 ，BETA-glycerophosphate 甘油磷酸钠，Na2P2O4 焦磷酸钠等。对这些蛋白酶抑制剂的溶解配制，贮存液与工作液浓度，保存都做了详细的说明。



蛋白酶抑制剂

PMSF：

特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂，如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶和凝血酶，也抑制半胱氨酸蛋白酶如木瓜蛋白酶（可逆的地面处理）。

溶解性：溶于异丙醇，乙醇，甲醇和丙二醇果>10mg/ml。在水溶液中不稳定。在100%异丙醇， +25℃时稳定至少9个月
分子量：174.2

使用：贮存浓度：200mM，工作浓度：1mM



Leupeptin 亮肽素

特性：抑制丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶，木瓜蛋白酶，纤溶酶，和组织蛋白酶B

溶解性：高度溶于水（1mg/ml）。4℃一周稳定,分成小份冷冻在-20℃至少6个月

分子量：C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4:475.6

C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4 x H2O:493.6

使用：贮存浓度：1mg/ml，工作浓度0.5 ug/ml (1mM)



Aprotinin抑肽酶

特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂，抑制纤维蛋白溶酶， 激肽释放酶，胰蛋白酶，糜蛋白酶的高活性。不抑制凝血酶或因子X。

溶解性：易溶于水（10mg/ml）或缓冲液（例如，tris，0.1M，pH8.0）。pH约7-8的溶液在4℃可保存1周，分装保存在-20℃可至少保存6个月。避免反复冻融, pH>12.8的碱性环境可使其灭活。

分子量：6,512

使用：贮存浓度:1mg/ml, 工作浓度：0.06–2.0 ug/ml(0.01–0.3 uM)



Pepstatin胃蛋白酶抑制剂

特性：抑制天冬氨酸（酸）蛋白酶如胃蛋白酶，肾素，组织蛋白酶D，凝乳酶， 许多微生物酸性蛋白酶

溶解性：溶于甲醇约1mg/ml； 可溶于乙醇，过夜溶解可达到1 mg/ml；在6当量乙酸中溶解度为300ug/ml。4℃稳定一周，分装储存于-20℃时可保存1个月

分子量： 685.9

使用：贮存浓度：1mg/ml，使用浓度：0.7 μg/ml(1 μM)



EDTA-Na2

特性：金属蛋白酶抑制剂

溶解性：溶于水至0.5M，在pH8-9的条件下，4℃稳定至少6个月
分子量: 372.24

使用：工作浓度：0.2–0.5 mg/ml(0.5–1.3 mM)，不需现用现配，在溶液pH值调至8-9时再加入。



磷酸酶抑制剂

NaF氟化钠

溶解性：溶于水

分子量： 41.99

使用： 贮存液：5M    工作浓度：10-20mM

Na3VO4 原矾酸钠

分子量：183.91

溶解性：溶于水，我们购买过来的是原矾酸钠.原矾酸钠需要经过处理以后才能成为激活的矾酸钠,激活的矾酸钠才具有抑制去磷酸化的作用.原矾酸钠变成激活的矾酸钠的过程是:
100mM原矾酸钠激活储存液配制
(1).取0.183克的原矾酸钠溶解于10ml的双蒸水中,加酸调节PH至10(颜色变黄)
(2).煮至无色
(3).室温冷却
(4).重调PH至10
(5)重复（１）（２）（３）（４）直至溶液保持无色，并且ＰＨ稳定于10,分装100ul/管,每10ml裂解液加一管.(终浓度为1mM),-20度保存.

使用： 贮存液：100mM 工作浓度：1mM



BETA-glycerophosphate 甘油磷酸钠

溶解性：溶于水

分子量：306.11

使用：贮存液：100mM  工作浓度：25mM



Na2P2O4 焦磷酸钠

溶解性：溶于水

分子量：265.9

贮存液：100mM, 工作浓度：1-2 mM