在摇瓶表达的还不错的细胞一上2L的罐子表达就上不去是什么原因啊？

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扫把(943712530)  16:15:28
想请教各位一个问题，在摇瓶表达的还不错的细胞一上2L的罐子表达就上不去是什么原因啊？溶氧 pH都蛮好的啊？
沐莞清(63092395)  16:40:39
是不是营养不行了呀，一般情况下，罐子上的溶养情况要比摇瓶里的好，这就会出现一个情况，细胞密度一直长的很高，但是同时会把营养消耗掉，到了蛋白表达阶段没有营养了，所以表达就不好了
扫把(943712530)  16:42:19
但是糖和谷氨酰胺都还蛮高的啊
沐莞清(63092395)  16:43:58
糖和谷氨酰胺有多高呀，是不是太高了抑制生长了呀
扫把(943712530)  16:44:14
现在只能通过生化分析仪来监测
沐莞清(63092395)  16:44:42
采用补料了是吧
扫把(943712530)  16:44:47
但是和摇瓶里的初始培养基是一样的啊
沐莞清(63092395)  16:45:04
细胞密度有多高呀
扫把(943712530)  16:45:45
嗯，之前没补的表达很低，现在补了表达还是没上来啊。后期最高到一千万吧
沐莞清(63092395)  16:48:22
你肯定你的细胞株够稳定吧
扫把(943712530)  16:48:46
嗯，摇瓶里多稳定的
eggle(562737459)  16:49:27
你把罐子里的细胞再转一点到摇瓶里头养，看看表达怎么样
(_无  菌︶ㄣ<woo159@qq.com>  16:49:50
细胞株够稳定 你们怎么评价的
eggle(562737459)  16:50:47
表达量稳定细胞株就稳定喽
沐莞清(63092395)  16:50:49
传了多少代够稳定呀？
扫把(943712530)  16:51:28
传了3，4个月，每个月评价一次
沐莞清(63092395)  16:56:53
从种子库开始，到摇瓶培养结束，大概要分裂5-6次，也就是传5-6代，如果发酵罐种子从种子库开始，到发酵结束，达到你所说的细胞密度水平估计要传12代左右
扫把(943712530)  17:00:13
你把罐子里的细胞再转一点到摇瓶里头养，看看表达怎么样
嗯，可以试一下，但是取什么时候的好呢，还是多取几次？
沐莞清(63092395)  17:02:53
取发酵将近结束的，要是表达还跟以前的差不多的话就能证明是你的罐子工艺不行，如果跟以前的相差很大的话就说明细胞株不够稳定
扫把(943712530)  17:05:12
如果跟以前的相差很大的话就说明细胞株不够稳定
是说细胞在罐子的培养条件中无法稳定的表现出摇瓶中的表现吗，那需要重新筛细胞株吗？

西门吹雪(250871415)  17:06:05
估计要，不过可以再取一支同批号的试试
扫把(943712530)  17:08:26
嗯，好的，那各位以前遇到过筛到的细胞在罐子怎样都表达不上去的情况吗？如何解决啊？如果重筛的话太痛苦了啊
扫把(943712530)  17:09:19
还是在确定之前就选几株在罐子里试过之后依照罐子的表现定啊？
沐莞清(63092395)  17:10:02
罐子上选是不太可能的
沐莞清(63092395)  17:12:11
一般都还是在摇瓶上筛的，只是你摇瓶上的做不好，才怀疑是种子的问题的
扫把(943712530)  17:13:01
摇瓶上做过复苏后稳定性的评价，还不错的啊
西门吹雪(250871415)  17:13:09
细胞是自己转的么
西门吹雪(250871415)  17:13:18
还是直接买的工程细胞呢
扫把(943712530)  17:13:26
自己建的
西门吹雪(250871415)  17:14:22
你做研发的
扫把(943712530)  17:14:24
筛了好久选出来的
扫把(943712530)  17:14:27
嗯
西门吹雪(250871415)  17:14:34
公司 还是高校
扫把(943712530)  17:14:44
现在开始做中式
扫把(943712530)  17:14:48
公司
西门吹雪(250871415)  17:15:22
那你加油了， 又筛又表
西门吹雪(250871415)  17:15:25
不累啊
西门吹雪(250871415)  17:15:43
招人专门负责筛
扫把(943712530)  17:16:10
累死了啊，还要做培养基优化
扫把(943712530)  17:16:25
各位有什么好的策略没？
扫把(943712530)  17:16:39
关于培养基优化